発生過程における哺乳動物・大脳新皮質の領域特異化を決定する遺伝子群の検索

寻找决定哺乳动物新皮质在发育过程中区域特化的基因组

• 批准号: 12780583
• 负责人: 榎戸 靖
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780583/
• 关键词: ニューロン; 大脳; RLCS; 発達; 神経栄養因子; 大脳皮質; マウス; 皮質領野; アポトーシス

発生過程にある大脳皮質領域のステージ特異的に発現される遺伝子群の検索を目指し解析を行った。昨年度までの研究では、おもに胎生18日から生後10日目ICRマウス大脳新皮質で発現するmRNAからcDNAを合成し、RLCS法を用いてプロファイリングを行った。その結果、胎生期大脳新皮質後部に高い発現をしめす遺伝子スポットが再現性よく得られた。そこでこれをゲルから切り出し、PCR法を用いてスポットクローニングを行った。その結果、目的とする約200bp長さのcDNA断片を得ることが出来た。本年度は、さらに遺伝子発現プロファイルを脳神経系の記憶・学習といった可塑性に深く関与する神経栄養因子に制御される遺伝子群に絞って解析を行いたいと考え、脳由来神経栄養因子(BDNF)ノックアウトマウスと正常マウス脳についてRLCSを行い、これまで得られた実験データとの比較を試みた。生後10日目のBDNFマウスと同腹の野性型マウス全脳からmRNAを抽出しcDNA合成を行った。その後、RLCS法によりBspHI-HincII、NcoI-HincII、NheI-HincIIの制限酵素の組み合わせでプロファイリングを行った。その結果、両者の間で発現パターンの異なるスポットを得ることができた。特に興味深かいものとして、M1uI-HincIIでプロファイリングした際にBDNFノックアウトマウスで約2倍に遺伝子発現上昇しているスポット再現性よく同定することが出来た。このスポットは異なる親から生まれた同腹仔マウス同士でも再現性がみられたため、cDNA断片をシークエンスするための現在クローニングを行っている。今後このスポットをシークエンスして遺伝子配列を同定し、発生に伴う変動や空間的な発現を解析したい。また、神経疾患モデルマウスなどを利用することでそれらが神経機能障害に関わるかどうか確かめたい。

The process of birth is a special process in the cortical area of ​​​​the big skin. Yesterday's research on the 18th day after birth, the 10th day after birth, the ICR マウス大脳 neocortex で発Currently, we are using the Synthesis of mRNA and cDNA, and the RLCS method using the same technology. As a result, the posterior part of the neocortex during the fetal period is high and the appearance is high.そこでこれをゲルから出り出し, PCR method いてスポットクローニングを行った. The result and purpose of the test are that a cDNA fragment of approximately 200 bp in length was obtained. This year's は、さらに伝子発 appear in the プロファイルを脳神経级のMemory・Study といったPlasticity and depth of the barrier and the control of the factors that control the nature of the plasticityいと卡え, 脳 origin神経栄NUTRITIONAL FACTOR (BDNF) ノックアウトマウスとNormal マウス脳についてRLCSを行い、これまで得られた実験データとのComparisonをtrialみた. On the 10th day after birth, the wild type of BDNF is extracted from the same abdomen as the wild type, and the mRNA is extracted and the cDNA is synthesized.その后, RLCS method uses restriction enzymes of BspHI-HincII, NcoI-HincII, and NheI-HincII.そのRESULT, 両者の间で発 appear パターンのdifferent なるスポットをget ることができた. Special interest deep taste, M1uI-HincII BDNF ノッThe クアウトマウスで is about 2 times the same as the original one.このスポットはdifferent なる Kiss から生まれた Same belly boy マウス Same person でもReproducibility がみられたため, cDNA fragment をシークエンスするためのnow クローニングを行っている. From now on, the このスポットをシークエンスして伝子配を同定し,発生に accompanying the う変动や的な発appearをanalyticsしたい.また, 神経Disorder モデルマウスなどをutilize することでそれらが神経 function disorder に关わるかどうか正かめたい.

项目成果

Inamura N,Aniki T,Enokido Y,Nishio C,Aizawa S, et al.: "Role of p53 in DNA strand break-induced apoprosis in organorypic slice culture from the mouse cerebellum."Journal of Neuroscience Research. 60・4. 450-457 (2000)

Inamura N、Aniki T、Enokido Y、Nishio C、Aizawa S 等人：“p53 在小鼠小脑器官切片培养中 DNA 链断裂诱导的细胞凋亡中的作用”。神经科学研究杂志 60・4。 -457 (2000)

Inamura N., Enokido Y., Hatanaka H.: "Involvement of c-Jun N-terminal Kinase and caspase 3-like protease in DNA demage-induced, p53-mediated apoptosis of cultured mouse cerebellow granule neurons"Brain Research. Vol.904,no.2. 270-278 (2001)

Inamura N.、Enokido Y.、Hatanaka H.：“c-Jun N 末端激酶和 caspase 3 样蛋白酶参与 DNA 损伤诱导、p53 介导的培养小鼠小脑颗粒神经元细胞凋亡”大脑研究。

Murai M., Enokido Y., Inamura N.et al.: "Early postnatal ataxia and abnormal cerebellar development in mice lacking Xeraterma Pigmentosum group A and Cockayne Syndrome group B DNA repair genes"Proceedings of National Academy of Sciences USA. Vol.98,no.23.

Murai M.、Enokido Y.、Inamura N.等人：“缺乏 Xeraterma Pigmentosum A 组和 Cockayne 综合征 B 组 DNA 修复基因的小鼠产后早期共济失调和小脑发育异常”美国国家科学院院刊。

Inamura N,Enokido Y,Hatanaka H: "Involvement of c-Jun N-terminal kinase and caspase 3-like protease in DNA damage-induced, p53-mediated apoprosis of cultured mouse cerebellar granule neurons"Brain Research. (in press). (2001)

Inamura N、Enokido Y、Hatanaka H：“c-Jun N 末端激酶和 caspase 3 样蛋白酶参与 DNA 损伤诱导、p53 介导的培养小鼠小脑颗粒神经元凋亡”脑研究。