血清アミラーゼ活性の基準範囲はアミラーゼ遺伝子のコピー数多型に依存するか

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臨床検査で用いられている血清アミラーゼ活性は、個体内変動より個体間変動(個体間差)が大きい検査項目の一つであることは古くから知られていたが、その理由は不明であった。最近、アミラーゼ遺伝子(唾液型アミラーゼ遺伝子;AMY1)のコピー数が人によって異なり、特に炭水化物の多い食事を好んでとる人種は、コピー数が増える方向に進化してきたこと、従って、人種によってアミラーゼ遺伝子数が異なることが報告された(Perry et al, Nat Genet 2007)。このことから、各個体の血清アミラーゼ活性が、アミラーゼ遺伝子のコピー数と正の相関を示すと考え、各個体の血清アミラーゼ活性(特に唾液型アミラーゼ)、唾液中のアミラーゼ活性とアミラーゼ遺伝子のコピー数を調べ、その相関性について明らかにし、血清アミラーゼ活性の個体間差が大きい理由を明らかにすることを目的とした。遺伝子解析研究の倫理委員会に申請し、ボランティア各位から書面での同意を得て血液と唾液を採取した。血液の血清成分・唾液は遠心した後、日本臨床化学会(JSCC)標準化対応法準拠試薬を用いてアミラーゼ総活性、膵型アミラーゼ活性を測定した。個体によってアミラーゼ活性が幅広く分布していることを再確認した。全血からEZ1自動核酸抽出機を用いてDNAを抽出し、測定試料とした。定量的PCRの系は、ライトサイクラーを用いてサイバーグリーン法で構築した。PCRプライマーは、既報の配列を参考にして作成した。内在性コントロールとして、TP53遺伝子増幅用プライマーも合成した。それぞれの増幅産物の配列が目的とするアミラーゼ、TP53であることを塩基配列決定により確認した。このようにして測定した20人のボランティア各人のアミラーゼ各遺伝子のコピー数とアミラーゼ総活性、唾液型アミラーゼ、膵型アミラーゼ活性との相関について統計処理を行っている。