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抗炎症蛋白質の新しい薬剤送達システムの開発

开发抗炎蛋白新型药物递送系统

基本信息

批准号：
22926014
负责人：
宮中宏
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22926014/
关键词：
コラーゲン結合ドメイン融合蛋白質免疫関連疾患

项目摘要

研究目的:抗炎症蛋白質であるPAF-AH (platelet-activating factor acetylhydrolase)及び炎症メディエーターであるケモカインとコラゲナーゼ由来のコラーゲン結合ドメイン(CBD)の融合蛋白質を作製し、そのコラーゲン結合能と生物活性を調べる。研究方法:ヒト血中型PAF-AH及びヒトCXCL8, CXCL12, CCL2とC.histolyticumコラゲナーゼのCBDの融合蛋白質発現用ベクター(pGEX-4T-2使用)を作製し、大腸菌で発現を行う。精製した融合蛋白質の不溶性コラーゲンに対する結合活性とPAF-AH活性、あるいはケモカイン受容体活性化の指標としてp44/p42 MAPKのリン酸化を調べる。研究成果:CB-PAF-AH(コラーゲン結合性PAF-AH),CB-CXCL8, CB-CCL2は大腸菌を用いた発現系で効率良く産生され、グルタチオン親和性クロマトグラフィーにより高純度に精製された。一方、CB-CXCL12は今回検討した条件下では発現効率が低いため、生産条件の更なる検討が必要である。CB-PAF-AH, CB-CXCL8, CB-CCL2はすべてCB-EGFやCB-FGFと同等のコラーゲン結合能を示したことから、これらの融合蛋白質においてもCBDが本来の機能を維持していると考えられる。この結果は、CBDを利用したコラーゲン結合性融合蛋白質の作製が特定の蛋白質に制限されないことを示している。今回、CB-PAF-AHの酵素活性を検討するには至らなかったが、CB-CXCL8とCB-CCL2はJurkat細胞においてp44/p42MAPKのリン酸化を促進したことから、ケモカイン活性を保持している可能性が高い。本研究の成果は、疾患モデル動物を対象とした治療実験を進める上で有用と考えられる。

Objective: anti-inflammatory protein (platelet-activating factor acetylhydrolase) and anti-inflammatory protein (platelet-activating factor acetylhydrolase) and anti-inflammatory protein (platelet-activating factor acetylhydrolase) were used to combine the fusion protein of anti-inflammatory protein (CBD) and anti-inflammatory protein. Methods: the fusion protein of CXCL8, CXCL12, CCL2, C.histolyticum, CBD, CBD was used as the fusion protein, and the fusion protein was detected by Elisa (use of pGEX-4T-2). The fusion protein, insoluble protein, fusion protein, PAF-AH activity, receptor activity, p44/p42 MAPK protein and acidified protein were used to bind the activity of the fusion protein. Research results: CB-PAF-AH (combinative PAF-AH), CB-CXCL8, CB-CCL2 strains were used to improve the rate of health, sex, and quality. On the one hand, under the current conditions of CB-CXCL12, the rate of health is low, and the conditions of birth are even more necessary. The combination of CB-PAF-AH, CB-CXCL8, CB-CCL2, CB-EGF, CB-FGF and so on can show that the fusion protein can be used to maintain the ability to maintain the quality of CBD. The results showed that CBD protein was used as a specific protein to limit the expression of the fusion protein. This time, the enzyme activity of CB-PAF-AH, the activity of enzyme, the activity of enzyme, the In this study, the results of this study, the results of the study, the results of this study, and the results of this study.