プロテオミクスへの「ADP―リボシル化タンパク質同定法」の応用

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タンパク質の"ADP-リボシル化"についての研究を進展させるために、モデルペプチドを用いた実験系でADP-リボシル化ペプチドの特異的選択法と、修飾ペプチドの修飾部位とアミノ酸配列の決定法の原理を確立し、論文発表した(Osago H, et al. Precursor ion scanning and sequencing of arginine-ADP-ribosylated peptide by mass spectrometry. Anal.Biochem., 393 : 248-254 (2009))。その原理を、実際のタンパク質へ応用するために、(1)～(3)を計画し、それぞれ以下のような結果を得た。(1):LCの溶出、質量分析部への導入、イオン化時の電圧などの条件の検討新たに導入されたLC-ESI/MS/MSにおけるADP-リボシルモデルペプチドの測定最適条件を決定した。同時に導入されたナノLC-MALDI-TOF/MS/MSを用い、マトリックスの検討を行い、さらに高感度で特異的な選択・同定法を考案中である。(2):ADP-リボースに親和性をもつボロン酸カラムによるADP-リボシル化ペプチド濃縮法の確立リン酸部分に親和性を持つ樹脂により、ある程度の濃縮効果を認めたが、実サンプル向けのスケールダウンが今後の課題である。(3):タンパク質のゲル内の消化、LCによる消化廃物の分離、計算値による推定MSからのADP-リボシル化ペプチドの選択の検討通常のゲル内消化のpH条件では修飾部分の安定性に不適であることを明らかにし、これを回避する方法を検討中である。Dr.Sung (Massachusetts General Hospital Center for Computational and Integrative Biology Simches Research Center)からの共同研究依頼を受け、実際のタンパク質の修飾部位決定を進めており、この方法の有用性が証明される結果が得られる予定である。