ヒト表皮膜骨格蛋白質(4. 1蛋白質)の機能に関する形態的及び生化学的解析

人表皮膜骨架蛋白（4.1蛋白）功能的形态生化分析

基本信息

批准号：
08770616
负责人：
清水忠道
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

膜骨格蛋白質についての生化学的研究の進歩と膜機能の定量的測定法の開発により,膜骨格の構造と機能の密接な関わりが明らかになってきた。とりわけ,スペクトリン,4. 1蛋白質及びアクチン等に量的,質的異常を認める赤血球では変形能,膜安定性等の機能が低下しており早期に網内系細胞に捕らえられ,寿命が短縮して溶血性貧血となることが解明されている。本研究ではこれらの膜骨格蛋白質の皮膚(表皮細胞)における機能を解明することを目的として以下の検討を行なった。培養ヒト表皮細胞を用いた実験においてCaスイッチにより4. 1蛋白質およびフォドリンの細胞質から細胞膜への分布の変化が認められた。さらにフォルボールエステルの添加により同様の分布の移行が認められた。これらの蛋白質の表皮細胞膜間接着への関与が示唆される(Shimizu et al, Biol Cell, 1996)。我々は、尋常性乾癬表皮細胞において特異的に存在する45kDaの4. 1蛋白質がalternative splicingによる産物である可能性を調べるために、4. 1蛋白質のmRNAをRT-PCR法により解析した。その結果、尋常性乾癬表皮細胞からのRNAを用いたPCR産物に正常表皮細胞においては認められないバンドを確認した。これは乾癬表皮細胞の4. 1蛋白質のsplicingの異常によるものと考えられ、この異常なバンドのシークエンスの解析を現在進めている。この解析により乾癬表皮細胞に特異的にみられる異常蛋白質が膜結合ドメインのどの部分の欠損により生じた蛋白質であるかが判明し、ひいては正常4. 1蛋白質の表皮細胞における機能の解析につながると考えられる。また、皮膚悪性腫瘍である有棘細胞癌、基底細胞上皮腫において4. 1蛋白質の発現の減少が観察された(manuscript under revew)。さらに、我々は,4. 1蛋白質のみならず表皮細胞にアンキリンが存在することも確認し、報告した(Shimizu et al, Arch Dermatol Res, 1996)。

膜骨骼蛋白的生化研究进展以及膜功能定量测量的发展揭示了膜骨骼结构的结构和功能之间的密切关系。特别是，已经揭示了谱蛋白，4.1蛋白质和肌动蛋白，诸如可变形性和膜稳定性之类的功能的红细胞降低，并在网状内核细胞中捕获，缩短其寿命并导致溶血性贫血。这项研究进行了以下研究，目的是阐明皮肤中这些膜骨骼蛋白的功能（表皮细胞）。在使用培养的人表皮细胞的实验中，通过CA开关观察到4.1蛋白和禽类蛋白从细胞质到细胞膜的分布。此外，当添加佛波酯时，观察到相同的分布。有人提出这些蛋白质参与表皮细胞互膜粘附（Shimizu等，Biol Cell，1996）。我们通过RT-PCR分析了4.1蛋白的mRNA，以研究斑块牛皮癣表皮细胞中特异性存在的45 kDa 4.1蛋白是替代剪接的产物。结果，使用斑块牛皮癣表皮细胞中的RNA在PCR产物中证实了在正常表皮细胞中未发现的条带。这被认为是由于银屑病表皮细胞中4.1蛋白质的异常剪接引起的，我们目前正在对这种异常带的序列进行分析。该分析揭示了膜结合结构域的哪一部分在银屑病表皮细胞中特异性观察到的异常蛋白是蛋白质是由膜结合域中缺陷产生的蛋白质，因此导致对表皮细胞中正常4.1蛋白质功能的分析。此外，在鳞状细胞癌和基底细胞上皮瘤中观察到4.1蛋白的表达降低，这些细胞癌是恶性皮肤肿瘤（REVEW下的手稿）。此外，我们证实并报道了表皮细胞和4.1蛋白中存在藻蛋白（Shimizu等，Arch Dermatol Res，1996）。