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癌細胞の転移浸潤におけるトリプシノーゲンmRNA誘導機構の解明

阐明胰蛋白酶原 mRNA 在癌细胞转移侵袭中的诱导机制

基本信息

批准号：
08771665
负责人：
加藤靖正
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771665/
关键词：
Metastasis Invasion RT-PCR ECM トリプシン

项目摘要

STKM-1クローン(S4、R3)は、悪性度、トリプシン合成能ともにS4細胞の方がR3細胞よりも高い。これらのクローンを継代することなく同一のディッシュ内で無血清培地にて維持するとトリプシノーゲンmRNAの発現は上昇する。このことはディッシュに表面に蓄積した細胞外基質による作用の可能性が高い。そこでコンフルエントのS4およびR3細胞を無血清培地にて維持した後のフラスコ(細胞由来の細胞外基質でコートされている)を作成した。さらにFBS、マトリゲル、ラドシン(STKM-1が分泌する細胞接着分散因子)でそれぞれコートしたフラスコを作成した。これらのフラスコにR3細胞を播種して24時間後のmRNA発現を調べると、その発現量はFBS≒ラドシン≒マトリゲル<R3<S4の順であった。これらの結果は、癌細胞が分泌する細胞外基質がトリプシノーゲンmRNAを誘導したことを示しており、悪性度の高い細胞程誘導活性が高いことを示している。コートされている蛋白質を抽出してSDS-PAGEにより分析すると、非還元で分子量160-、140-、120-、110-kDaの高分子に4本のバンドが得られた。トリプシノーゲンには、現在少なくとも3種類の遺伝子配列が報告されている。そこで、S4、R3細胞の発現しているトリプシノーゲンの分子種について検討した。RT-PCRにより増幅されたフラグメントを制限酵素(Pst1、Sac1)で切断した。その結果、S4細胞においては2型の発現が92%、1型が8%、R3細胞においては2型が62%1型が38%であり、S4細胞の方がトリプシノーゲン2が優位であったことを示している。トリプシノーゲン2は、Ca^<2+>存在下で自己活性化が促進されるが、Ca^<2+>の存在は、トリプシノーゲン1の自己活性化を阻害することからトリプシノーゲン2の分泌が癌細胞の浸潤に特に重要であることが示唆された。

STKM-1 cells (S4, R3) are highly reactive, highly reactive, and highly reactive. The expression of mRNA in the serum was maintained at the same time. The possibility of extracellular matrix accumulation is high. S4 and R3 cells were cultured in serum-free medium and maintained in the medium. FBS, STKM-1, STKM-1, STKM-1 The mRNA expression of R3 cells was regulated 24 hours after seeding, and the mRNA expression of FBS was regulated 24 hours after seeding. As a result, the extracellular matrix secreted by cancer cells is highly inducible, indicating a high degree of cell-induced activity. Protein extraction and SDS-PAGE analysis were performed on four non-reducing polymers with molecular weights of 160-, 140-, 120-, and 110-kDa. 3 types of genetic material are listed in the report. The development of S4, R3 cells and the molecular species of S4, R3 cells were investigated. RT-PCR amplification is limited to restriction enzymes (Pst1, Sac1). The results showed that 92% of S4 cells showed type 2, 8% of R3 cells showed type 1, 62% of R3 cells showed type 2 and 38% of R3 cells showed type 1. In the presence of Ca^<2+>, self-activation is promoted. In the presence of Ca ^<2 +>, self-activation of self-activation is inhibited.