酸性環境によるプロテアーゼの分泌誘導機構とプロテアーゼ分泌阻害因子の検索

酸性环境下蛋白酶分泌诱导机制及蛋白酶分泌抑制剂的探索

• 批准号: 05771568
• 负责人: 加藤 靖正
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771568/
• 关键词: Metastasis; ECM; Trypsin; Serine proteinase; Invasion

癌の転移に関わる酵素としてトリプシン様(TR)、プラスミン様(Pla)、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ-様(u-PA)酵素について、癌細胞の培養上清から検出を行い、分泌機構について検討を行った。また、ヒトスキルス胃癌細胞株STKM-1をクローニングし、それらの転移性と酵素の分泌について比較検討した。ラット顎下腺由来癌細胞の樹立を行い、その性状について検討した。23種の癌細胞が分泌するTR、Pla、u-PAの酵素活性について調べた結果、中性pHの培養条件下では、TRは、10種の細胞株から検出され、Plaは、13種の細胞株から検出され、u-PAは、11種の細胞株から検出された。一方、これらの細胞を酸性pHの培養条件下で培養するとTRは、9種の細胞株が誘導され、Plaは、8種の細胞株が誘導され、u-PAは、6種の細胞株が誘導された。中でも肺線癌や膀胱癌、シュワンノーマ、グリオブストーマ等で高いTR活性が検出され、あるいは誘導された。中性pHの培養条件下でTRを多量に分泌するSTKM-1細胞をクローニングし、分泌しているTRの活性の異なる3種の細胞株を樹立した。この細胞をヌードマウスの腹腔に投与すると、その致死性は、TRの分泌量に相関した。STKM-1細胞は無血清環境で培養することでTRの活性とmRNAの発現量が増加した。DMBAにより発癌された顎下線が、TRを分泌していることを見い出した。そこでこの組織から、癌転移のモデルとなる細胞の樹立を試みた。クローニングされた癌細胞は、25-kDaのTR分泌を保持しており、in vivoにおいて高い浸潤能を有していた。TR、Pla、u-PAは、いずれもセリンプロテアーゼである。従来の研究では、癌細胞の浸潤や転移にはゼラチナーゼなどのメタロプロテアーゼが主として働いていることが報告されている。加えて、これらのセリンプロテアーゼは、本研究により広範囲に分泌していることが明らかとなり、セリンプロテアーゼを分泌している多くの細胞では、インビトロでの浸潤活性を有していることから、セリンプロテアーゼは、癌細胞の浸潤や転移に重要な働きを行っていることが示唆された。

Cancer metastasis related enzymes and protein (TR), protein (Pla), protein (U-PA) enzymes, cancer cell culture supernatant detection, secretion mechanism detection. A comparative study on the secretion of migratory enzymes in gastric cancer cell line STKM-1 was conducted. The growth and development of submandibular glandular carcinoma-derived cells 23 kinds of cancer cells secreted TR, Pla, u-PA enzyme activity regulation results, neutral pH culture conditions, TR, 10 kinds of cell lines were detected, Pla, 13 kinds of cell lines were detected, u-PA, 11 kinds of cell lines were detected. One of the four cell lines was cultured at acidic pH, and 9 cell lines were induced. Pla, 8 cell lines were induced. U-PA, 6 cell lines were induced. In addition, there is a high level of TR activity in lung cancer, bladder cancer and other diseases. STKM-1 cells secreting TR in high amounts under neutral pH conditions were established and three cell lines with different TR activity were established. These cells are related to the amount of TR secreted in the abdominal cavity and the lethality of the cells. STKM-1 cells were cultured in serum-free environment, and TR activity and mRNA expression increased. DMBA is the first to release the virus. The tissue of the tumor is removed, and the tumor cells are established. The secretion of 25-kDa TR in cancer cells remains high in vivo. TR、Pla、u-PAは、いずれもセリンプロテアーゼである。Recent studies have shown that the invasion and migration of cancer cells are not possible. In this study, we found that the secretion of tumor cells is important for the invasion and migration of cancer cells.