心筋の興奮収縮連関におけるCaチャネルとリアノジン受容体の相互作用に関する研究

Ca通道与兰尼碱受体在心肌兴奋-收缩耦合中相互作用的研究

• 批准号: 08772081
• 负责人: 赤羽 悟美
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772081/
• 关键词: 心臓; カルシウムチャネル; リアノジン受容体; カルシウム; 興奮収縮連関; 心筋; 心室筋細胞; 細胞骨格

申請者はまず、L-型Caチャネルとリアノジン受容体の相互作用を、様々な濃度のCaキレート剤(0.2mM Fura-2;2 mM Fura-2;14 mM EGTA plus 2mM Fura-2;10 mM BAPTA)を細胞内に灌流することにより細胞内遊離Caの拡散距離を変えた条件下で(10nm〜>500nm)単離ラットおよびモルモット心室筋細胞を用いてI_<Ca>とCa^<2+>_i-transientを同時測定することにより検討した。その結果、2mM Fura-2または14 mM EGTA plus 2mM Fura-2により細胞内遊離Caの拡散距離を50nm以下に抑えても、L-型Caチャネル刺激により引き起こされる小胞体からのCa^<2+>放出や放出されたCa^<2+>によるL-型CaチャネルのCa^<2+>依存性不活性化のプロセスは疎外されないことを見い出し、L-型Caチャネルとリアノジン受容体は50nm以内の距離で接近して存在することを明らかにした。次に、L-型Caチャネルとリアノジン受容体のcross-signalingへの細胞骨格蛋白系の関与を検討するために、特にSRからのCa^<2+>放出を敏感に反映するL-型CaチャネルのCa^<2+>依存性不活性化に注目し、trypsin、carboxypetidase A、microtubules脱重合促進薬のcolchicine、microtubules重合安定化剤のtaxolの作用を検討した。trypsin、carboxypetidase A、およびtaxolは細胞内灌流により適用した。trypsinおよびcarboxypetidase AはI_<Ca>を増大し不活性加速度を著名に遅らせた。taxolはI_<Ca>の不活性加速度を遅らせる蛍光に加えて、I_<Ca>のrun downを防いだ。colchicine単独の作用は明らかではなかった。現在、。(1)上記の薬物により抑制された不活性化成分がCa^<2+>依存性不活性化であるか、(2)L-型Caチャネルの不活性化とSRからのCa^<2+>放出の関係がどのように変化したか、の2点について検討中である。なお、本実験は奨励研究Aの研究費で購入したデスク型防振台の上に装置を組んで実施した。

Applicants は ま ず, L - type Ca チ ャ ネ ル と リ ア ノ ジ ン let body の を interaction, others 々 な concentration の Ca キ レ ー ト tonic (0.2 mM Fura - 2, 2 mM Fura - 2; 14 mM EGTA Fura - 2 plus 2 mM; 10 mM BAPTA) に を cell perfusion す る こ と に よ り intracellular free Ca の company spread distance を - え で た conditions (10 nm ~ 500 nm) > 単 from ラ ッ ト お よ び モ ル モ ッ ト ventricular muscle cells を using い て I_ (Ca > と Ca ^ < 2 + > _i - transient を simultaneous determination す る こ と に よ り beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result, 2mM Fura-2また また 14 mM EGTA plus 2mM Fura - 2 に よ り intracellular free Ca の を company spread distance below 50 nm に え suppression て も, L - type Ca チ ャ ネ ル stimulus に よ り lead き up こ さ れ る small cell body か ら の Ca ^ 2 + < > release や release さ れ た Ca ^ 2 + < > に よ る L - type Ca チ ャ ネ ル の Ca ^ 2 + > < dependence not activeness の プ ロ セ ス は 疎 outside さ れ な い こ と を see い し, L type Ca チ ャ ネ ル と リ ア ノ ジ ン by let body は で の distance close to within 50 nm し て exist す る こ と を Ming ら か に し た. に, L - type Ca チ ャ ネ ル と リ ア ノ ジ ン by let body の cross - signaling へ の cells bone protein is の masato and を beg す 検 る た め に, に SR か ら の Ca ^ 2 + > < release を sensitive に reflect す る L - type Ca チ ャ ネ ル の Ca ^ 2 + > < dependence not activeness に し, trypsin, c The effects of arboxypetidase A, microtubules discoincidence promoting drug colchicine, and microtubules coincidence stabilizer taxol を検 and た. trypsin, carboxypetidase A, およびtaxol によ intracellular perfusion によ によ is applicable to <s:1> た. trypsinおよびcarboxypetidase A および I_<Ca>を increases the <s:1> inactivity acceleration を famous に遅らせた. Taxol は I_ (Ca > の is not active acceleration を 遅 ら せ る 蛍 light に plus え て, I_ (Ca > の run down を anti い だ. colchicine単 has a unique effect, 単, ら で, な, った, った. Now... (1) written の 薬 content に よ り inhibit さ れ た activity does not melt composition が Ca ^ 2 + < > dependence not activeness で あ る か, (2) L - type Ca チ ャ ネ ル の not activeness と SR か ら の Ca ^ 2 + < > release の masato is が ど の よ う に variations change し た か, 2 points の に つ い て 検 beg in で あ る. Youdaoplaceholder0, this laboratory awarded research A <s:1> research funds で to purchase the に device を set of んで actual construction た on the <s:1> たデス type <s:1> anti-vibration table <e:1>.

项目成果

Kurokawa, J., Adachi-Akahane, S., and Nagao, T.: "1,5-Benzo thiaze pine Binding Domain is Located on the Extra-cellular Sice of the Cardiac L-type Ca^<2+> Channel." Molecular Pharmacology. 51. 262-268 (1997)

Kurokawa, J.、Adachi-Akahane, S. 和 Nagao, T.：“1,5-苯并噻嗪松结合域位于心脏 L 型 Ca^<2> 通道的细胞外部分。”

Hagiwara, M., Adachi-Akahane, S., and Nagao, T.: "High Affinity Binding of DTZ323, a Novel Derivative of Diltiazem, to Rabbit Skeletal Muscle L-type Ca^<2+> Channels." Journal of Pharmacology & Experimental Therapeutics. (in press). (1997)

Hagiwara, M.、Adachi-Akahane, S. 和 Nagao, T.：“地尔硫卓的新型衍生物 DTZ323 与兔骨骼肌 L 型 Ca^<2> 通道的高亲和力结合。”

Adachi-Akahane, S., Cleemann, L., & Morad, M.: "Cross-signaling between L-type Ca^<2+> Channels and Ryanodine Receptors in Rat Ventricular Myocytes" Journal of General Physiology. 108. 435-454 (1996)

足立赤羽，S.，克莱曼，L.，