小腸オリゴペプチド輸送体の組織及び細胞内分布の免疫化学的解析と薬物輸送特性

小肠寡肽转运蛋白的组织和细胞内分布和药物转运特性的免疫化学分析

• 批准号: 08772166
• 负责人: 崔 吉道
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772166/
• 关键词: ペプチド; βラクタム抗生物質; トランスポーター; 消化管吸収; 免疫組織化学; 刷子縁膜; アンチセンス; アフリカツメガエル

1.オリゴペプチド輸送担体cDNAクローン(PepT1)の薬物輸送能の検討PepT1 cRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に微注入しその遺伝子産物の輸送活性を、ceftibuten及びcefadroxilをモデル基質として測定した結果、両薬物ともジペプチド[^<14>C]GlySarと同様の輸送を示した。このことから本輸送担体がβ-ラクタム抗生物質をも基質として受け入れ輸送することが明らかとなった。また[^<14>C]GlySarとceftibuten及びcefadroxilとは共存により相互に阻害が見られたことから、これらが全て同一の認識部位を介して輸送されてることが示された。PepT1の翻訳開始領域付近に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて小腸の全mRNAにより発現する輸送に対する阻害効果を検討した結果、ほぼバックグランドレベルまで抑制された。ことから、上記薬物の消化管吸収が本輸送担体によってほぼ説明できることも示すことが出来た。2.PepT1の小腸上皮細胞における細胞内局在性および組織間分布の検討PepT1のカルボキシ末端部分のペプチドを合成、免疫しポリクローナル抗体(anti-PepT1/C)を得ることが出来た。この抗体を用いて、刷子縁膜及び側基底膜のWestern解析、また小腸その他の臓器の組織切片固定標本に対して免疫組織染色を行い、光学顕微鏡及び電子顕微鏡レベルで観察した結果、PepT1が小腸上皮細胞の刷子縁膜にのみ局在する事を明らかにすることが出来た。3.以上の結果からオリゴペプチド輸送担体として単離したcDNAクローンPepT1がβ-ラクタム抗生物質に対しても輸送活性を持ち、小腸上皮細胞の刷子縁膜に局在し、薬物の消化管からの吸収に寄与していることを実証することが出来た。

1. Evaluation of PepT1 cRNA for Drug Delivery Activity of PepT1 cRNA, ceftibuten and cefadroxil for Microinjection into Oocytes. Results of matrix assay, drug delivery activity, and drug delivery activity<14>. This is the first time that a carrier has been used to transport an antibiotic substance. GlySar<14>, ceftibuten and cefadroxil are mutually exclusive. PepT1's translation initiation domain is close to the target site, and the target site can be used to detect the inhibition effect of small intestine mRNA expression. The digestive tract of the upper part of the digestive tract absorbs and conveys the substance. 2. PepT1 is distributed in cells and tissues. PepT1 is synthesized in the terminal part of the intestine. Anti-PepT1/C is produced. The results of antibody detection, Western analysis of brush membrane and lateral basement membrane, fixation of tissue sections of other organs of the small intestine, immunohistochemical staining, optical microscopy and electronic microscopy, and identification of PepT1 and brush membrane of small intestine epithelial cells were presented. 3. The results showed that the activity of β-peptide in antibiotic transport was maintained, the brush membrane of intestinal epithelial cells was present, and the absorption of antibiotics in digestive tract was confirmed.

项目成果

林喜代美: "小腸オリゴペプチド輸送担体クローンを利用したβ-ラクタム抗生物質の経口デリバリーのスクリーニング系開発への試み" Drug Delivery System. 11(3). 205-213 (1996)

Kiyomi Hayashi：“尝试开发一种使用小肠寡肽转运载体克隆口服递送 β-内酰胺抗生素的筛选系统”，Drug Delivery System 11(3)。

Y.Sai: "Immunolocalization and pharmacological relevance of oligopeptide transporter PepT1 in intestinal absorption of β-lactam antibiotics" FEBS Lett.392. 25-29 (1996)

Y.Sai：“寡肽转运蛋白 PepT1 在 β-内酰胺抗生素肠道吸收中的免疫定位和药理学相关性”FEBS Lett.392 (1996)。