共焦点レーザー顕微鏡を用いたペプチドの細胞内動態解析と脳実質細胞標的化への応用

使用共焦激光显微镜分析肽的细胞内动力学及其在脑实质细胞靶向中的应用

• 批准号: 07772237
• 负责人: 崔 吉道
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772237/
• 关键词: 吸着介在型; エンドサイトーシス; ペプチド; 血液脳関門; 血管内皮; 細胞内動能; 蛍光; 共焦点レーザー

脳毛細血管内皮細胞の吸着介在型エンドサイトーシス(AME)機構を利用したペプチドの脳内送達を目指して、蛍光標識した合成塩基性テトラペプチド(H-MeTyr-Arg-MeArg-D-Leu-CONH(CH_2)_8NH_2、NBD-C-001-C8)をモデル化合物として、培養脳毛細血管内皮細胞における細胞内動態を、共焦点レーザー顕微鏡を用いて解析した。更に放射性標識ペプチドを用いて定量的な実験も併せて行った。その結果、1.NBD-C-001-C8の細胞への内在化(取り込み)過程を、共焦点レーザー顕微鏡によって得られる光学的断層像について経時的に形態観察を行ったところ、細胞内にエンドサイトーシスを示す顕著な顆粒状染色が見られ、細胞表面吸着と細胞内移行とが分別可能であることがわかった。2.蛍光標識された顆粒は、取り込み約10分から30分にかけてluminalからanti-luminal方向へと経時的に深部へと移行した。このことは、画像解析によりその蛍光強度を定量化することによっても確認され、確かにペプチドの細胞への内在化が進行していることを実証することに成功した。3.ペプチドの内在化はプロタミン、ダンシルカダベリン等により阻害され、AMEによる内在化であることが示された。4.細胞の糖鎖選択的消化酵素処理により細胞表面の吸着サイトとしてヘパラン硫酸の関与が示唆された。5.以上の結果は放射標識ペプチド([^<125>I]001-C8)を用いた定量実験の結果と良い一致を示した。これらにより、脳毛細血管内皮細胞のAME機構を蛍光標識体を用いた形態的観察、及び放射性標識体を用いた定量実験それぞれの結果により実証することに成功した。本研究の成果は、これまで困難であったペプチド性医薬品の脳送達が、分子に適当なカチオン性修飾を施すことにより可能になることを示すものと考えられる。

Hairy vascular endothelial cells adsorb target cells (AME) by using target cells delivered to target cells and light labelled cells to synthesize H-MeTyr-Arg-MeArg-D-Leu-CONH (CH_2) _ 8NH_2, NBD-C-001-C8) compounds, cultured vascular endothelial cells, cytosol intracellular dynamics, The common focus is to parse the image with the help of the microphone. More importantly, the radioactive label should be used to quantify the amount of radiation. The results of the experiment, the process of 1.NBD-C-001-C8 cytosol internalization (extraction), the confocal microscope microarray, the optical disconnection of the optical microscope, the morphology of the optical microscope, the detection of the temperature in the cell, the detection of the temperature in the cell, the detection of the effect of granule staining, The absorption of intracellular migration cells on the surface of the cells may cause significant changes in the cell surface. two。 Use light to identify the size of the grain, and take about 10 minutes and 30 minutes to change the depth of the luminal to the anti-luminal direction. The picture is analyzed, the light intensity is quantified, the light intensity is quantified, the confirmation is confirmed, and the internalization is performed successfully. 3. In the process of internalization, there are some problems, such as blocking, AME, internalization, and so on. 4. The digestive enzyme selected by the cell sugar is adsorbed on the surface of the cell. 5. The above results show that the radiological markers ([^ & lt;125>I] 001-C8) are consistent with the results of quantitative measurement. The vascular endothelial cell (AME) was used to examine the morphology of the body, and the radioactivity marker was used to quantify the results. The results showed that the test was successful. In this study, the results of the study were reviewed, and the results of this study were reviewed in this study. in this study, the results of this study were reviewed in this study.