トランスポーター発現アデノウイルスベクターを用いたペプチド様抗がん剤の脳腫瘍送達

使用表达转运蛋白的腺病毒载体向脑肿瘤递送肽样抗癌药物

• 批准号: 12217054
• 负责人: 崔 吉道
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217054/
• 关键词: 血液脳関門; 抗がん剤; トランスポーター; オリゴペプチド; アデノウイルス; green fluoresscet protein; 蛍光顕微鏡; ドラックデリバリー

本研究は、ペプチド様抗がん剤の脳移行障壁となっている血液脳関門にペプチドトランスポーターであるhPEPT1を発現させ、抗がん剤の脳移行性を向上させることを目的として、ペプチド性抗がん剤を輸送するhPEPT1と黄色蛍光タンパク質とのキメラ化タンパク質を発現するアデノウイルスベクターAdhPEPT1-EYFPを作製した。AdhPEPT1-EYFPによるhPEPT1のペプチド輸送活性のin vitroでの発現を、研究代表者等がこれまでに不死化、樹立したラット脳毛細血管内皮細胞RBEC1を用いて[^3H]グリシルサルコシンを基質に検討した。その結果、AdhPEPT1-EYFPを感染させたRBEC1で、経時的な[^3H]グリシルサルコシン取込みの上昇がウイルスの用量依存的に見られた。AdhPEPT1-EYFP感染細胞による[^3H]グリシルサルコシン取り込みには、hPEPT1の特徴pH依存性および10mM非標識グリシルサルコシンによる阻害がみられた。RBEC1細胞におけるhPEPT1-EYFPキメラ遺伝子のmRNAレベルでの発現は、RT-PCR法により確認した。発現したhPEPT1-EYFPキメラタンパク質の細胞膜への発現は蛍光顕微鏡を用いて確認した。正常細胞である初代培養脳毛細血管内皮細胞を用いても検討を行ったが、RBEC1と同様な結果が得られた。hPEPT1-EYFPのin vitroでの発現が確認できたことから、in vivo発現についても予備的な検討を行った。Takasato等の方法に従い、ラットの内径動脈にAdhPEPT1-EYFPウイルス溶液を灌流し感染を行った。本実験は手術法が複雑であることから、手術が成功した2例についてのみ感染動物を2日間飼育した後、Oldendolfに従ってbrain uptake index法によりペプチド脳移行性の検討を試みた。その結果、[^3H]カルノシンの脳移行性は非感染動物と比べて上昇する傾向がみられた。以上、本ベクターを用いることによって、in vivoでhPEPT1機能を誘導できる可能性が示された。また、がん細胞での発現が認められるOCTNおよびOATPトランスポーターの検討も行った。

In this study, the development of hPEPT1, the upward migration of anti-inflammatory agents, and the development of hPEPT1-EYFP were investigated. The development of hPEPT1 in vitro and its role in the development and development of capillary endothelial cells RBEC1 in vitro are discussed by researchers and other researchers. As a result, AdhPEPT1-EYFP infection is associated with RBEC1, which is a dose-dependent event. AdhPEPT1-EYFP infection of cells in the [^3H] spectrum, hPEPT1 characteristic pH-dependence, and 10mM non-labeled spectrum inhibition hPEPT1-EYFP mRNA expression in RBEC1 cells was confirmed by RT-PCR. The discovery of hPEPT1-EYFP was confirmed by optical microscopy. Normal cells were cultured in primary culture and capillary endothelial cells were used to study the effects of RBEC1 on endothelial cells. hPEPT1-EYFP in vitro detection confirmed, in vivo detection prepared Takasato et al.'s method is used to perfuse and infect the inner diameter artery with AdhPEPT1-EYFP solution. In this paper, the surgical method was used to detect the migration of infected animals in 2 cases. The results showed that the migration of [^3H] rDNA to non-infected animals tended to increase. The possibility of inducing hPEPT1 function in vivo is shown above. OCTN and OATP-based solutions for cell development

项目成果

Tamai, I.: "Molecular and functional characterization of organic cation/carnitine transporter family in mice."J.Biol.Chem.. 275 (51). 40064-40072 (2000)

Tamai, I.：“小鼠有机阳离子/肉碱转运蛋白家族的分子和功能表征。”J.Biol.Chem.. 275 (51)。

Sai, Y.: "Selective delivery of peptide anticancer drugs via oligopeptide transporter expressed in cancer cells"Millenial World Congress of Pharmaceutical Sciences Abstracts. 61 (2000)

Sai, Y.：“通过癌细胞中表达的寡肽转运蛋白选择性递送肽抗癌药物”千年世界制药科学大会摘要。

Nakanishi,T.: "Cancer cell-targeted drug delivery utilizing oligopeptide transport activity"Int.J.Cancer. 88・2. 274-280 (2000)

Nakanishi，T.：“利用寡肽转运活性的癌细胞靶向药物递送”Int.J.Cancer 88・274-280（2000）。

Tamai,I.: "Molecular identification and characterization of novel members of the human organic anion transporter (OATP) family"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273・1. 251-260 (2000)

Tamai，I.：“人类有机阴离子转运蛋白（OATP）家族新成员的分子鉴定和表征”Biochem.Biophys.Res.Commun. 273・1（2000）。