血管内皮細胞の接着分子発現に及ぼす血流の効果に関する研究

血流对血管内皮细胞粘附分子表达影响的研究

• 批准号: 08780817
• 负责人: 是永 理佐
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780817/
• 关键词: 血管内皮細胞; ずり応力; 接着分子; VCAM-1; メッセンジャーRNA; 転写

これまでの研究で、マウス血管内皮細胞に流れずり応力を負荷した際細胞表面の接着分子VCAM-1の発現が静的コントロール群に比し有意に低下することを報告してきた。本研究では、このVCAM-1発現に対する流れずり応力の影響が内皮細胞の遺伝子のレベルにまで及んでいるかについて検討した。マウスリンパ節細静脈の内皮細胞に流体力学的に設計した流れ負荷装置で定量的な流れずり応力を負荷し、流れ負荷群および静的コントロール群の細胞からAGPC法により総RNAを抽出し、逆転写PCR法を用いてVCAM-1のmRNAの発現量の変化を解析した。結果、静的コントロール群に比し流れ負荷群ではVCAM-1mRNAの発現量は著明に減少した。(1.5dynes/cm^2の流れずり応力24時間負荷で50%減少)この流れ負荷によるVCAM-1mRNAの発現量の減少は流れの負荷時間および流れずり応力の大きさに依存性であった。次にマウスゲノムライブラリーからVCAM-1遺伝子をクローニングし、プロモーター領域のシークエンスを解析した。ハーバード大Gimbroneら提唱のSSRE (shear stress responsive element) はVCAM-1遺伝子には存在しないことを確認した。また、VCAM-1遺伝子の転写活性の変化をシフェラーゼアッセイにて測定したところ、VCAM-1遺伝子の転写活性は流れ負荷により有意に抑制された。(3.5dynes/cm2の流れずり応力24時間負荷で50%減少)VCAM-1遺伝子プロモーターを適当な長さに削除し転写活性を測定するdeletion analysisの結果から、流れ負荷による転写抑制に関連した遺伝子配列は転写開始点より-698b以内に存在することが示唆された。今回の研究により、マウス内皮細胞において血流に起因する流れずり応力は接着分子VCAM-1の発現をmRNAおよび蛋白のレベルで抑制するが、これはVCAM-1遺伝子の転写抑制に起因するものと考えられた。

This study reports that vascular endothelial cell flow is under stress and that the expression of the adhesion molecule VCAM-1 on the surface of cells is under stress. The present study is to investigate the effects of different factors on the expression of VCAM-1 and its expression in endothelial cells. Hydrodynamic design of vascular endothelial cells in nodal veins, quantitative flow analysis of vascular endothelial cells As a result, the expression of VCAM-1mRNA decreased significantly in the static group compared with the current group. (1.5 dynes/cm^2) The decrease in VCAM-1mRNA production due to the load on the flow field was 50% less than that due to the load on the flow field. Next, we need to analyze the VCAM-1 gene in the field of music and music. The SSRE (shear stress responsive element) of VCAM-1 is confirmed. VCAM-1 gene expression activity was determined by enzyme analysis, and VCAM-1 gene expression activity was intentionally inhibited by enzyme analysis. (3.5 dynes/cm2 flow rate: 24 hours load: 50% reduction)VCAM-1 gene transfer: appropriate length of time to remove gene transfer activity: deletion analysis results: flow rate: 24 hours load: deletion inhibition: correlation: gene transfer: sequence: presence of gene transfer within-698b of gene transfer start point: deletion analysis results: The present study is aimed at examining the causes of endothelial cell blood flow and the inhibition of mRNA expression and protein expression of VCAM-1 gene.

项目成果

Y.Wang: "Contribution of sustained Ca^<2+> elevation for nitric oxide production in endothelial cells and subsequent modulation of Ca^<2+> transient in vascular smooth muscle cells in coculture." J.Biol.Chem.271. 5647-5655 (1996)

Y.Wang：“持续 Ca^2 升高对内皮细胞中一氧化氮的产生以及随后共培养中血管平滑肌细胞中 Ca^2 瞬时调节的贡献。”

J.Ando: "Differential display and cloning of shear stress-responsive messenger RNAs in human endothelial cells." Biochem.Boiphys.Res.Commun.225. 347-351 (1996)

J.Ando：“人内皮细胞中剪切应力响应性信使 RNA 的差异展示和克隆。”

W. Yang: "Exogenous nitric oxide inhibits proliferation of cultured vascular endothelial cells." Biochem. Biophys. Res. Commun.203. 1160-1167 (1994)

W. Yang：“外源性一氧化氮抑制培养的血管内皮细胞的增殖。”

Y.Takada: "Fluid shear stress increases the expression of thrombomodulin by cultured human endothelial cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.205. 1345-1352 (1994)

Y.Takada：“流体剪切应力增加了培养的人内皮细胞的血栓调节蛋白表达。”

H.Tsuboi: "Flow stimulates ICAM-1 expression time-and shear stress-dependently in human endothelial cells." Biochem.Boiphys.Res.Commun.206. 988-996 (1995)

H.Tsuboi：“流量刺激人内皮细胞中 ICAM-1 的表达时间和剪切应力依赖性。”