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部位特異的遺伝子導入法による生理活性物質生産動物細胞株の樹立

定点基因转移法建立产生生理活性物质的动物细胞系

基本信息

批准号：
09750873
负责人：
西島謙一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

実際の生産プロセスにおいては樹立した細胞株の性質が安定であることが重要である。そこで本年度は細胞株の性質に大きな影響を与える染色体の安定性に着目して研究を行った。染色体の末端に存在し、染色体の安定化に大きな役割を果たすといわれるテロメア領域に着目した。約0.5kbのテロメア繰り返し配列を持つコピー数可変型ベクターを作製した。このベクターはSV40ウイルスの温度感受性ラージTタンパク遺伝子を持つので、33℃においてはプラスミド状に一万コピー近く増幅されるのに対し、39℃においては数十コピーにまでそのコピー数が抑えられる。このベクターをサルCV-1細胞に遺伝子導入し多数のクローンを樹立した。期待通り、39℃では細胞あたり約50コピーであったベクターが33℃では数千コピーにまで増幅されることが確認された。数千コピーのべクターが含むテロメア配列の総量は染色体末端のテロメア配列の約10倍量となるため、テロメアに本来結合するタンパク質を競合的に奪い、染色体が不安定になることを期待した。33℃において培養した細胞株の染色体を解析したところ染色体の末端が融合した異常な染色体が多数認められ、染色体が末端でお互いに融合することをテロメアが防いでいることが示された。この時細胞は偏平状で大きな形態を示し、微小核様の構造が観察され、これに伴い細胞増殖がM期で停止していた。また通常は発現していないβ-ガラクトシダーゼ遺伝子、cdkインヒビターp21が発現していた。これらのことから染色体の不安定さが遺伝子の発現を含む細胞の諸性質に大きな影響を与えることが確認された。

In the international market, it is important that the plant is stable and important. This year, we will focus on the sex of the plant, the sex of the plant, the stability of the chromosome and the stability of the chromosome. The chromosome ends exist, the chromosomes are stabilized, the fruits are cut, and the field is focused. This is about 0.5kb. You can count the number of people you can use to make sure that you don't know what to do. Temperature sensitivity, temperature, temperature Please enter the majority number of CV-1 cells. It is expected that the temperature is 39 ℃, the cell temperature is about 50 ℃, the temperature is 33 ℃, the temperature is thousands of times, and the amplitude is very high. Thousands of times more than 10 times the amount of DNA in the end of the chromosome, the number of chromosomes, and the number of chromosomes. At 33 ℃, the chromosomes of the cell lines were analyzed, the ends of chromosomes were fused, the ends of autosomes were fused, the ends of chromosomes were fused with each other, and the ends of chromosomes were fused with each other. When the cell is flattened, the shape of the cell is flattened, the micronucleus is used to observe the cell cycle, and the cell colonization is stopped in the first phase. This is usually the case. I don't know. I don't know. The chromosome is unstable, the chromosomes are unstable, and the chromosomes are unstable.