NMRとX線によるクロコウジカビ酸性プロテアーゼAの折れたたみ機構の解析
利用 NMR 和 X 射线分析黑曲霉酸性蛋白酶 A 的折叠机制
基本信息
- 批准号:08272203
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
クロコウジカビAspergillus niger var.macrosporusが分泌する酸性プロテアーゼAは基質特異性、阻害剤に対する反応性、一次構造、分子量等の性状が、従来のペプシン型酵素とは著しく異なる新規の酸性プロテアーゼである。本研究では、プロテアーゼAの立体構造、変性中間状態ならびに中性変性過程の解析を行ない、プロテアーゼAの折れたたみ機構を明らかにすることを目指してX線結晶構造解析とX線小角散乱測定を行った。本酵素が活性を示すpH1.5〜3で得られた結晶についてX線回折を測定したところ、1.5Åの分解能の反射が得られた。重原子誘導体の探索を行った結果、Hgおよび2種類のPtの同型置換体が得られた。電子密度図から、この分子はクロワッサン型をしており、αヘリックスを含まずβシートのみからなることが分かった。アスパラギン酸プロテアーゼも主としてβシートからなるクロワッサン型をしており、プロテアーゼAは分子量がアスパラギン酸プロテアーゼに比べて約半分であるにもかかわらず、分子の外形はアスパラギン酸プロテアーゼと大雑把には相似形といえる。ただ、βシート構造の分子全体に対する配向が両者で明らかに異なっており、プロテアーゼAの立体構造法は新規の3次元構造だと考えられる。また、酸性から弱アルカリ性の種々のpHでX線小角散乱の測定を行った。その結果、GuinierプロットからpHが高くなるに従って慣性半径Rgが増大することが示された。またKratkyプロットから、(1)pH4.5ではfolded structure、pH6.75や7.0ではunfolded structureであること、(2)pH6.2では完全なfolded stateでもunfolded stateでもない中間的な状態であること、が分かった。pH4.5からpH8.0への遷移速度をX線小角散乱測定したところ、時定数0.5秒の遷移が見られた。
A. niger var.macrosporus secretes a new type of acidic enzyme with characteristics such as substrate specificity, inhibitor reactivity, primary structure, and molecular weight. This study focuses on the analysis of the three-dimensional structure and the neutral state of the X-ray crystal structure. The activity of this enzyme was measured at pH1.5 ~ 3 and the X-ray reflection was measured at pH1.5 ~ 3. As a result of the exploration of heavy atom inducers, two kinds of Pt isoforms were obtained. The electron density is different, and the electron density is different. The amount of sub-particles in the matrix is about half the amount of sub-particles in the matrix. The outer shape of the sub-particles in the matrix is similar to that in the matrix. The molecular whole of the structure is aligned with each other, and the three-dimensional structure of the three-dimensional structure of the structure is discussed. The pH value of the acid, weak acid and weak acid species was measured by X-ray small angle scattering. As a result, Guinier's inertia radius Rg increases as pH increases.またKratkyプロットから、(1)pH4.5ではfolded structure、pH6.75や7.0ではunfolded structureであること、(2)pH6.2では完全なfolded stateでもunfolded stateでもない中间的な状态であること、が分かった。pH4.5 ~ pH8.0 ~ pH4.5 ~ pH8.0 ~ pH4.5 ~ pH4.5 ~ pH8.0 ~ pH4.5 ~ pH4.5 ~ pH8.0 ~ pH4.0 ~ pH4.0 ~ pH4.5 ~ pH4.5 ~ pH4.
项目成果
期刊论文数量(25)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Zenno,S.,Koike,H.,Tanokura,M.and Saigo,K.: "Conversion of NfsB.a minor Escherichia coli nitroreductase,to a flavin reductase similar in biochemical properties to Frase I,the major flavin reductase in Vibrio fischeri,by a single amino acid substitution." J
Zenno,S.,Koike,H.,Tanokura,M. 和 Saigo,K.:“将 NfsB.一种次要的大肠杆菌硝基还原酶转化为生化特性与 Frase I 类似的黄素还原酶,Frase I 是费氏弧菌中的主要黄素还原酶
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Nishivama,M.,Kinoshita,M.,Kudo,H.,Horinouchi,S.and Tanokura,M.: "Enhancement of the turnover number of thermostable malate dehydrogenase by deleting hydrogen bonds around the catalytic site." Biochemical and Biophysical Research Communications. 225. 844-8
Nishivama,M.、Kinoshita,M.、Kudo,H.、Horinouchi,S. 和 Tanokura,M.:“通过删除催化位点周围的氢键来提高热稳定苹果酸脱氢酶的周转数。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Zenno,S.,Koike,H.,Kumar,A.N.,Jayaraman,R.,Tanokura,M.and Saigo,K.: "Biochemical characterization of NfsA,the Escherichia coli major nitroreductase cxhibiting a high amino acid sequence homology to Frp,a Vibrio harveyi flavin oxidoreductase." Journal of Ba
Zenno,S.、Koike,H.、Kumar,A.N.、Jayaraman,R.、Tanokura,M. 和 Saigo,K.:“NfsA 的生化特征,NfsA 是一种与 Frp 具有高度氨基酸序列同源性的大肠杆菌主要硝基还原酶,
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Hatano,K.,Tanokura,M.and Takahashi,K.: "Tertiary Structure Comparison of Bromelain Inhibitor VI from Pineapple Stem with Bovine Pancreatic Trypsin Inhibitor." Proceedings of Japan Academy. 72B. 104-107 (1996)
Hatano,K.、Tanokura,M. 和 Takahashi,K.:“菠萝茎中菠萝蛋白酶抑制剂 VI 与牛胰蛋白酶抑制剂的三级结构比较”。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kukimoto,M.,Nishiyama,M.,Tanokura,M.,Adman,E.T.and Horinouchi,S.: "Studies on protein-protein interaction between copper-containing nitrite reductase and pseudoazurin from Alcaligenes faecalis S-6." Journal of Biolgical Chemistry. 271. 13680-13683 (1996)
Kukimoto,M.、Nishiyama,M.、Tanokura,M.、Adman,E.T. 和 Horinouchi,S.:“含铜亚硝酸还原酶和粪产碱菌 S-6 中的伪天青蛋白之间的蛋白质-蛋白质相互作用研究”。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
田之倉 優其他文献
ヒトReticulocalbin-1のカルシウム依存的構造変化
人 Reticulocalbin-1 的钙依赖性结构变化
- DOI:
- 发表时间:
2014 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
鈴木 七緒;陳 思思;今井 ファビアナ リカ;澤野 頼子;宮川 拓也;田之倉 優;米澤 直人 - 通讯作者:
米澤 直人
腸間膜リンパ節樹状細胞およびT細胞のレチノイン酸に関わる応答の加齢による変化
肠系膜淋巴结树突状细胞和 T 细胞视黄酸相关反应的年龄相关变化
- DOI:
- 发表时间:
2017 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
高野 智弘;上滝 隆太郎;宮川 拓也;朴 知賢;塩河 亜弥;好田 正;足立 (中嶋) はるよ;田之倉 優;八村 敏志 - 通讯作者:
八村 敏志
食餌性リジンによる筋肉イミダゾールジペプチド量および代謝遺伝子発現量への影響
膳食赖氨酸对肌肉咪唑二肽水平和代谢基因表达水平的影响
- DOI:
- 发表时间:
2015 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
高野 智弘;上滝 隆太郎;宮川 拓也;朴 知賢;塩河 亜弥;好田 正;足立 (中嶋) はるよ;田之倉 優;八村 敏志;鎌田拓也・寺尾怜史・原 崇・久保田真敏・大谷 元・加藤久典・藤井幹夫・藤村 忍・門脇基二;甲斐慎一・渡邊源哉・久保田真敏・門脇基二・藤村 忍 - 通讯作者:
甲斐慎一・渡邊源哉・久保田真敏・門脇基二・藤村 忍
植物の活性酸素種生成酵素 Rboh のCa2+ とリン酸化を介した活性制御機構とその進化
植物活性氧生成酶Rboh通过Ca2+和磷酸化的活性控制机制及其演化
- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
橋本貴史;橋本研志;板橋 武;宮川拓也;田之倉 優;朽津和幸 - 通讯作者:
朽津和幸
リン酸存在下での乾燥加熱による卵白タンパク質のリン酸化-とリン酸基の結合様式について
磷酸存在下干热加热蛋清蛋白的磷酸化及磷酸基团的结合模式
- DOI:
- 发表时间:
2008 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
林 葉子;李 ソウ鵬;胡 芳宇;澤野 頼子;田之倉 優;青木 孝良 - 通讯作者:
青木 孝良
田之倉 優的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
{{ truncateString('田之倉 優', 18)}}的其他基金
NMRを用いたメタボロミクス分析法の開発及び応用
NMR代谢组学分析方法的开发与应用
- 批准号:
12F02090 - 财政年份:2012
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
WWドメインの機能と特異性に関する総合理解を目指した構造構能相関研究
结构-结构相关性研究旨在全面了解WW域的功能和特殊性
- 批准号:
15657024 - 财政年份:2003
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Exploratory Research
発光細菌の発光反応関連酵素群のX線結晶構造解析
发光细菌发光反应相关酶的X射线晶体结构分析
- 批准号:
11169206 - 财政年份:1999
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ブロメラインインヒビターの3次元構造解析とそれに基づく阻害剤の開発
菠萝蛋白酶抑制剂的三维结构分析及基于其的抑制剂开发
- 批准号:
10163205 - 财政年份:1998
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
X線とNMRによるクロコウジカビ酸性プロテアーゼAの折れたたみ機構の解析
利用 X 射线和 NMR 分析黑曲霉酸性蛋白酶 A 的折叠机制
- 批准号:
10157201 - 财政年份:1998
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
キネシンとncdのNMRによる動的構造の解析
NMR 分析驱动蛋白和 NCD 的动态结构
- 批准号:
09279210 - 财政年份:1997
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
NMRとX線によるクロコウジカビ酸性プロテアーゼAの折れたたみ機構の解析
利用 NMR 和 X 射线分析黑曲霉酸性蛋白酶 A 的折叠机制
- 批准号:
09261205 - 财政年份:1997
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ブロメラインインヒビターの3次元構造解析とそれに基づく阻害剤の開発
菠萝蛋白酶抑制剂的三维结构分析及基于其的抑制剂开发
- 批准号:
09267204 - 财政年份:1997
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
NMRとX線小角散乱によるクロコウジカビ酸性プロテアーゼAの折れたたみ機構の解析
利用NMR和小角X射线散射分析黑曲霉酸性蛋白酶A的折叠机制
- 批准号:
07280203 - 财政年份:1995
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
りん核磁気共鳴法によるアクトミオシン反応中間体の立体構造の研究
磷核磁共振法研究肌动球蛋白反应中间体的三维结构
- 批准号:
03223205 - 财政年份:1991
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
相似国自然基金
适用膜蛋白-配体复合物结构测定的1H和19F距离约束检测的固体NMR方法研究
- 批准号:JCZRYB202500181
- 批准年份:2025
- 资助金额:0.0 万元
- 项目类别:省市级项目
NMR-CRISPR体系的构建及在肝癌ctDNA及miRNA联合检测中的应
用
- 批准号:
- 批准年份:2024
- 资助金额:0.0 万元
- 项目类别:省市级项目
基于 NMR 指纹特征图谱与代谢组学结合模式追踪土家药
血筒果实中抗类风湿关节炎的效应物质
- 批准号:2024JJ6347
- 批准年份:2024
- 资助金额:0.0 万元
- 项目类别:省市级项目
基于ResNet-CNN和2D1H.13C HSQC NMR技术的多基原藏药'阿布卡'品质整合评控体系构建
- 批准号:
- 批准年份:2024
- 资助金额:0 万元
- 项目类别:青年科学基金项目
基于微流控-μNMR平台的一滴血检测技术在糖尿病免疫表型分析中的应用研究
- 批准号:
- 批准年份:2024
- 资助金额:15.0 万元
- 项目类别:省市级项目
NMR研究乳酸化TGIF1调控TGF-β/Smad信号转导通路的分子机制
- 批准号:22374155
- 批准年份:2023
- 资助金额:50 万元
- 项目类别:面上项目
基于In-cell NMR策略对“舟楫之剂”桔梗中引经药效物质的快速发现研究
- 批准号:82305053
- 批准年份:2023
- 资助金额:30 万元
- 项目类别:青年科学基金项目
基于“Geo-marker新概念—HPLC-MS-SPE-NMR联用技术—RONUS-HSQC新方法”研究中药道地性的物质基础——以川芎为例
- 批准号:82374152
- 批准年份:2023
- 资助金额:48 万元
- 项目类别:面上项目
锌基复合金属氧化物催化CO2加氢反应的固体NMR谱学研究
- 批准号:22372160
- 批准年份:2023
- 资助金额:50 万元
- 项目类别:面上项目
超极化增强的固体NMR方法及在分子筛催化不饱和醛选择性加氢反应中的应用研究
- 批准号:22372179
- 批准年份:2023
- 资助金额:50 万元
- 项目类别:面上项目
相似海外基金
Revitalising NMR facilities in South Australia - Stage 2
振兴南澳大利亚 NMR 设施 - 第二阶段
- 批准号:
LE240100147 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Linkage Infrastructure, Equipment and Facilities
300 MHz NMR Spectrometer
300 MHz 核磁共振波谱仪
- 批准号:
536629481 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Major Research Instrumentation
13C NMR化学シフト値に基づくクレロダン骨格の簡便な相対立体配置決定法の確立と検証
基于13C NMR化学位移值确定氯罗烷骨架相对构型的简单方法的建立和验证
- 批准号:
24K18301 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
定常磁場勾配NMR法を用いた電池セル各部位の拡散係数の充放電その場解析
采用稳定磁场梯度核磁共振法对电池单元各部分的扩散系数进行原位充放电分析
- 批准号:
24K01595 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
NMRによる全固体電池の界面・表面状態解析とイオン伝導現象の関係解明
利用NMR分析全固态电池的界面/表面状态并阐明离子传导现象之间的关系
- 批准号:
24K01597 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
高温超伝導バルク磁石の強力な静磁場勾配による拡散NMRと分子識別の試み
尝试在高温超导块体磁体中使用强静磁场梯度进行扩散核磁共振和分子识别
- 批准号:
24K01618 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
酸化物ガラスのO-17MAS、MQMS NMRによる局所構造解析
利用 O-17MAS 和 MQMS NMR 分析氧化物玻璃的局部结构
- 批准号:
24H02580 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
GPCRと共役蛋白質の構造アンサンブル相関-擬細胞内環境DNP固体NMRの確立
GPCR与偶联蛋白之间的结构系综相关性-伪细胞内环境的建立DNP固态NMR
- 批准号:
23K27115 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
キナーゼのリン酸化・脱リン酸化を介したシグナル伝達制御のNMR動的構造生物学
通过激酶磷酸化/去磷酸化控制信号转导的 NMR 动态结构生物学
- 批准号:
23K27310 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
二次元拡散NMRを用いたセルロースの分子量決定に関する研究
二维扩散核磁共振测定纤维素分子量的研究
- 批准号:
24K09013 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)