出芽酵母の核に局在する新規アクチンファミリー タンパク質分子間相互作用の解析

位于酿酒酵母细胞核中的新型肌动蛋白家族的蛋白质-分子相互作用分析

• 批准号: 09760066
• 负责人: 原田 昌彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760066/
• 关键词: 出芽酵母; 組織特異的発現; ヌクレオソーム; 核タンパク質; アクチン関連タンパク質; アクチンファミリー; クロマチン; ヒストン; タンパク質間相互作用

Act3pは酵母の生育に必須なアクチン関連タンパク質(Actin-Related Protein:Arp)であり、そのアミノ酸配列のほぼ全域でアクチンに相同性を示すが、2ケ所に他のアクチンファミリータンパク質には存在しない挿入ペブチド領域がある。Act3pは核に局在しており、遺伝子発現制御への関与が示唆されている。Act3pのカルボキシ末端にヒスチジンタグを付加してゲノム上のACT3遺伝子と相同組換えを行うことで、Act3p-His6を発現する酵母株を作製した。この株の抽出液から、Ni-NTAカラムを利用して、Act3p-His6が含まれるタンパク質複合体を単離した。この両分をさらにゲルろ過カラムで分画し、抗Act3p抗体を用いてウエスタンプロットを行い、Act3pがおよそ300kDaのタンパク質複合体に含まれていることが示された。現在、このタンパク質複合体に含まれるタンパク質の解析を行っている。Act3pのアミノ酸配列の情報を用いてヒトESTデータベースをスクリーニングしたところ、Act3pに相同性を有する2つの配列が見い出された。これらの全長の配列を決定したところ、これらは互いに94%相同な新規Arpのアイソフォームであり、これらをhArpNα,βと名付けた。hArpNα,βとGFPとの融合タンパク質をHeLa細胞で発現させたところ、両者とも核への局在が観察され、ユウクロマチン領域にその多くが存在していた。さらに、hArpNα,βの組織特異的な発現をRT-PCRを用いて解析したところ、hArpNβは様々な組織で広く発現が認められるのに対し、hArpNαは脳でのみ発現していることが示された。hArpNα,βが出芽酵母Act3pと同じクラスに属するかについてはさらに検討が必要であるが、これらの結果は、ARPが脊椎動物の核機能にも関与しており、さらに組織特異的な機能をも有している可能性を示している。

Act 3p contains the Actin-Related Protein (Arp), which is essential for the growth of yeast, and shows that the amino acid sequence is the same across the entire domain. However, other Actin-Related Protein (Arp) still exists and has entered the field of textiles. Act3p: The authority to verify the existence of a legal entity and its relationship with the legal entity Act3 p-His6 yeast strain is produced by adding the same components to the ACt3 gene. The extract of this plant is isolated from Ni-NTA complex by Act3p-His6. The anti-Act3p antibody was used to detect the protein in the protein, and the Act3p antibody was used to detect the protein in the protein complex with a molecular weight of 300kDa. Now, the protein complex contains the protein and the protein is analyzed. The information on the allocation of acids in Act3p is used to determine the allocation of information in Act 3 p, and the allocation of information in Act3p is used to determine the allocation of information in Act3p. The total length of the column is determined by the new Arp. hArpNα,β and GFP fusion proteins are found in HeLa cells. Tissue-specific expression of hArpNα,β was analyzed by RT-PCR. hArpNα, β was detected by RT-PCR. hArpNα,β-budding yeast Act3p: The same species belongs to the same species and is necessary for discussion. As a result, ARP is related to vertebrate nuclear function and is likely to have tissue-specific functions.

项目成果

Kenji Shimada, et al.: "A nuclear matrix-associated high molecular weight nuclear antigen, HMNA, of chicken and marked decrease of its immunoreactivity during the progression of S-phase" Journal of Cell Science. 110. 3031-3041 (1997)

Kenji Shimada 等人：“鸡的核基质相关高分子量核抗原 HMNA 及其在 S 期进展过程中其免疫反应性显着降低”《细胞科学杂志》。

Viktoria Weber et al.: "Purification and nucleic-acid binding properties of a Saccharomyces cerevisiae protein involved in the control of ploidy" European Journal of Biochemistry. 249. 309-317 (1997)

Viktoria Weber 等人：“参与倍性控制的酿酒酵母蛋白的纯化和核酸结合特性”欧洲生物化学杂志。

Masahiko Harata,et al.: "Two isoforms of a human actin-related protein show nuclear localization and mutually selective expression between brain and other tissues" Biosci.Biotechnol.Biochem.63 (in press). (1999)

Masahiko Harata 等人：“人类肌动蛋白相关蛋白的两种异构体显示核定位以及大脑和其他组织之间的相互选择性表达”Biosci.Biotechnol.Biochem.63（正在印刷中）。