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Na^+,K^+-ATPaseのイオン輸送機構の解明

阐明Na^+,K^+-ATP酶的离子转运机制

基本信息

批准号：
09760275
负责人：
石井利明
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760275/
关键词：
Ptype ATPase Na^+K^+-ATPase Ca^<2+>-ATPase イオンポンプ

项目摘要

「Na^+,K^+-ATPaseのイオン輸送機構において、イオンセンサーがイオン輸送ドメインに直接相互作用することによりイオン通過孔開閉を調節する」をいう分子内ドメイン作業仮説の証拠を得るために、次に上げるNa^+とK^+のセンサーを装備したNa^+,K^+ATPaseαサブユニットとSERCA-ATPase間のキメラATPaseを作製した。キメラATPaseの命名法としては、ニワトリを、リン酸化部位とFSBA結合部位を用いて3分割し、それぞれの領域を大文字のNまたはCで表記する。したがって野性型Na^+,K^+ATPaseαサブユニットはNNNと、野性型SERCA-ATPaseはCCCと表示する。また、これら3領域をさらに細分割した場合、それぞれの領域を小文字のnまたはcで表記する。また、ニワトリNa^+,K^+-ATPaseのウアバイン結合ドメインは、ウアバインに対して高親和性結合を示すため、作製したすべてのキメラATPaseのウアバイン結合ドメイン内には、2個のアミノ酸点変異(T115R,N126D)を施することによりウアバイン低親和性型に変換し、発現用のホスト細胞であるHeLa細胞に内在するヒト型Na^+,K^+-ATPaseウアバイン高親和性型と区別出来るように工夫した。[nn__-/n]C[n/n__=/n]キメラATPaseは、ウアバイン低親和性のNa^+,K^+-ATPase活性と^<86>Rb^+輸送能を有することが明らかとなったが、[nn__-/c]C[c/n__=/n]キメラATPaseは、Na^+,K^+-ATPase活性および^<86>Rb^+輸送活性のどちらの機能も認められなかった。本結果より、Na^+,K^+-ATPaseの機能発現には[nn__-/c]C[c/n__=/n]の小文字で示したc領域に相当するNa^+,K^+-ATPaseの領域が重要であることがわかった。また。種々のキメラATPaseを操作することにより、Na^+,K^+のイオン交換輸送におけるイオン交換比の決定には、Na^+,K^+-ATPaseのC末端領域が重要であることを、電気生理学と生化学的手法の併用により明らかにした。

「Na^+,K^+-ATPaseのイオンTransportation mechanismにおいて、イオンセンサーがイオンTransportationメインに Direct interaction, することによりイオン, adjustment through pore opening and closing, する」, をいう, intramolecular ドメイン operation仮说の证拠を得るために、时に上げるNa^+とK^+のセンサーをequipmentしたNa^+,K^+ ATPaseαサブユニットとSERCA-ATPase马のキメラATPaseを Manufacturer. Nomenclature of キメATPaseとしては, ニワトリを, リンacidification site とFSBA The joint part is divided by いて3し, and the それぞれの区を大字のNまたはCでexpression is する.したがってWild-type Na^+,K^+ATPaseαサブユニットはNNNと, wild-type SERCA-ATPaseはCCCとexpressionする.また, これら 3 areas をさらにした occasions, それぞれの areas を small characters のn またはc で indicative する.また、ニワトリNa^+,K^+-ATPaseのウアバイン combines ドメインは、ウアバインに対してhigh affinity knot合たすべてのキメラATPaseのウアバイン Combined ドメイン内には, 2 のアミノ acid point variations ( T115R, N126D) low-affinity type low-affinity type に変changeし, 発 currently used のホストcell であるHe La cells have internal Na^+, K^+-ATPase high-affinity type and are differentiated by K^+-ATPase. [nn__-/n]C[n/n__=/n]キメラATPaseは、ウアバインlow affinityのNa^+,K^+-ATPase activityと^<86>Rb^+transportation abilityを有することが明らかとなったが、[nn__-/c]C[c/n__=/n]キメラATPaseは、Na^+,K^+-ATPase active および^<86>Rb^+transport active のどちらのfunctional もcognizeめられなかった. This result shows that the function of Na^+,K^+-ATPase is [nn__-/c]C[c/n__=/n] The small text indicates that the field of c is quite important. The field of Na^+,K^+-ATPase is very important.また. Kind of 々のキメラATPase をoperation することにより、Na^+,K^+のイオン exchange transport におけるイオン exchange ratio のdetermination には、 The C-terminal domain of Na^+, K^+-ATPase is important, and the technique of electrophysiology and biochemistry is used in conjunction with it.