十二指腸腺腺房細胞からの粘液分泌機構の解明

十二指肠腺泡细胞粘液分泌机制的阐明

基本信息

批准号：
09760276
负责人：
寺岡宏樹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Rakuno Gakuen University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760276/
关键词：
ブタ十二指腸腺 Ca^<2+>IP3 ムスカリン受容体 Fura2 パッチクランプ Substance P

项目摘要

消化物と共に十二指腸に流入する酸や消化酵素に対する防御機構として、十二指腸粘膜を被うアルカリ粘液層が重要であることはよく知られている。しかし、十二指腸腺を支配する神経伝達物質およびホルモン支配に関しての知見は乏しく、さらにその細胞内機構に関しては検討した報告さえ存在しない。本研究では発達した十二指腸腺を持つブタ由来の分離十二指腸腺腺房を作製し、Fura2を用いた〔Ca^<2+>〕i測定とパッチクランプによるチャネル電流の解析を行い、以下の成績を得た。A 十二指腸腺腺房の細胞内Ca^<2+>濃度の画像解析分離十二指腸腺腺房はアセチールコリン(ACh)の濃度依存性(10^<-7>〜10^<-5>M)に反応して、細胞内Ca^<2+>濃度(〔Ca^<2+>〕i)を増加させた。静止時には〔Ca^<2+>〕iの変動はなく、AChに対する反応も時間経過の早い相性の増加で、その上に乗る微小なCa^<2+>オッシレーションが観察されるに過ぎなかった。AChの反応はpirenzepineやmethoctramideでは影響されず、4-DAMPで消失したことより、M3受容体を介したものであると考えられる。AChによる〔Ca^<2+>〕i上昇は外液からのCa^<2+>除去では殆ど影響を受けず、タプシガルギンの前処置でほぼ消失したことから、細胞内ストアからのCa^<2+>放出が主要なCa^<2+>動員経路であることが示唆される。Ca^<2+>誘発性Ca^<2+>放出(CICR)を刺激するカフェインは全く影響しなかった。伝達物資候補(NOR、VIP、SP、 motilin、neurotensin、ATPなど)およびホルモン(secretin、cholecystkinin-8)の腺房細胞内Ca^<2+>動態に及ぼす影響を観察した結果、SPのみが〔Ca^<2+>〕i上昇を起こした。SPの反応は外液からのCa^<2+>除去では殆ど影響を受けなかった。B 十二指腸腺腺房細胞の膜電流解析パッチクランプ法による全細胞膜記録を行った。その結果、電位依存性Ca^<2+>チャネルや非選択性陽イオンチャネルによる電流は観察されなかった。しかし、保持電位0mVでAChにより外向き電流が観察された。また、同時に与えた傾斜波による外向き電流の若干の増加が生じた。保持電位0mVで、イノシトール3リン酸(IP3)の入ったピペットで全細胞記録を行ったところ、AChと同様の一過性の外向き電流が生じた。これらの成績はブタ十二指腸腺おそらく〔Ca^<2+>〕iにより活性化されるK+チャネルが存在し、AChは細胞内ストアからIP3を介して〔Ca^<2+>〕iを放出させることによりこのチャネルを刺激することが考えられる。

众所周知，覆盖十二指肠粘膜的碱性粘液层对于对酸和消化酶以及消化材料以及消化系统的消化酶的防御机制很重要。但是，对控制十二指肠腺的神经递质和激素控制的了解很少，也没有关于其细胞内机制的报告。在这项研究中，制备了来自带有十二指肠腺的猪的分离的十二指肠毒素，并使用Fura2进行[Ca^<2+>] I测量结果，并通过贴片夹对通道电流进行分析，从而产生以下结果。十二指肠腺泡中细胞内Ca^<2+>浓度的图像分析。十二指肠腺泡增加了乙酰胆碱（ACH）的浓度依赖性（10^<-7>至10^<-5> m），增加了细胞内Ca^<2+>浓度（[Ca^<2+>] I）。在静止时，[Ca^<2+>] i没有变化，对ACH的反应还增加了与时间快速流逝的兼容性，并且在其上仅观察到较小的Ca^<2+>骨化。 ACH反应不受肾上腺素或甲氧酰胺的影响，并且被4-DAMP丢失，因此被认为是由M3受体介导的。 [Ca^<2+>] I ACH的升高几乎不受外部流体中的Ca^<2+>去除的影响，并且几乎随着Thapsigargin的预处理而消失，这表明Ca^<2+>从细胞内存储中释放是招募的主要途径。咖啡因刺激的Ca^<2+> - 诱导的Ca^<2+释放（CICR）无效。我们观察到潜在的传染性材料（NOR，VIP，SP，Motilin，Neurotensin，ATP等）和激素（Secritin，Cholecystkilin-8）对腺泡材料的细胞内Ca^<2+>动力学的影响，并发现仅引起SP引起[Ca^<2+>] I I TEPATION。从外部溶液中除去Ca^<2+>几乎不会影响SP反应。 B：通过斑块夹法进行了十二指肠腺泡细胞总细胞膜记录的膜电流分析。结果，由于电压依赖性CA^<2+>通道或非选择性阳离子通道，未观察到电流。但是，ACH以0 mV的固定电势观察到了外部电流。此外，外在电流的略有增加是由同时应用的倾斜波引起的。用含有肌醇3磷酸盐（IP3）的移液管进行全细胞记录，在保持势为0 mV的情况下，导致类似于ACH的瞬时向外电流。这些结果很可能存在于存在由猪十二指肠[Ca^<2+>] I激活的K+通道中，并且ACH通过从细胞内存储中释放[Ca^<2+>] i来刺激该通道。