十二指腸腺腺房細胞からの粘液分泌機構の解明

十二指肠腺泡细胞粘液分泌机制的阐明

• 批准号: 09760276
• 负责人: 寺岡 宏樹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760276/
• 关键词: ブタ; 十二指腸腺; Ca^<2+>; IP3; ムスカリン受容体; Fura2; パッチクランプ; Substance P

消化物と共に十二指腸に流入する酸や消化酵素に対する防御機構として、十二指腸粘膜を被うアルカリ粘液層が重要であることはよく知られている。しかし、十二指腸腺を支配する神経伝達物質およびホルモン支配に関しての知見は乏しく、さらにその細胞内機構に関しては検討した報告さえ存在しない。本研究では発達した十二指腸腺を持つブタ由来の分離十二指腸腺腺房を作製し、Fura2を用いた〔Ca^<2+>〕i測定とパッチクランプによるチャネル電流の解析を行い、以下の成績を得た。A 十二指腸腺腺房の細胞内Ca^<2+>濃度の画像解析分離十二指腸腺腺房はアセチールコリン(ACh)の濃度依存性(10^<-7>〜10^<-5>M)に反応して、細胞内Ca^<2+>濃度(〔Ca^<2+>〕i)を増加させた。静止時には〔Ca^<2+>〕iの変動はなく、AChに対する反応も時間経過の早い相性の増加で、その上に乗る微小なCa^<2+>オッシレーションが観察されるに過ぎなかった。AChの反応はpirenzepineやmethoctramideでは影響されず、4-DAMPで消失したことより、M3受容体を介したものであると考えられる。AChによる〔Ca^<2+>〕i上昇は外液からのCa^<2+>除去では殆ど影響を受けず、タプシガルギンの前処置でほぼ消失したことから、細胞内ストアからのCa^<2+>放出が主要なCa^<2+>動員経路であることが示唆される。Ca^<2+>誘発性Ca^<2+>放出(CICR)を刺激するカフェインは全く影響しなかった。伝達物資候補(NOR、VIP、SP、 motilin、neurotensin、ATPなど)およびホルモン(secretin、cholecystkinin-8)の腺房細胞内Ca^<2+>動態に及ぼす影響を観察した結果、SPのみが〔Ca^<2+>〕i上昇を起こした。SPの反応は外液からのCa^<2+>除去では殆ど影響を受けなかった。B 十二指腸腺腺房細胞の膜電流解析パッチクランプ法による全細胞膜記録を行った。その結果、電位依存性Ca^<2+>チャネルや非選択性陽イオンチャネルによる電流は観察されなかった。しかし、保持電位0mVでAChにより外向き電流が観察された。また、同時に与えた傾斜波による外向き電流の若干の増加が生じた。保持電位0mVで、イノシトール3リン酸(IP3)の入ったピペットで全細胞記録を行ったところ、AChと同様の一過性の外向き電流が生じた。これらの成績はブタ十二指腸腺おそらく〔Ca^<2+>〕iにより活性化されるK+チャネルが存在し、AChは細胞内ストアからIP3を介して〔Ca^<2+>〕iを放出させることによりこのチャネルを刺激することが考えられる。

Digestive substances flow into the duodenum, and the defense mechanism of digestive enzymes is important. In addition, there is a lack of knowledge about the regulation of the duodenal gland, the regulation of the intracellular machinery, and the existence of reports. In this study, we developed the isolated duodenal gland cells from which the duodenal gland is held, measured [Ca^<2+>] i using Fura2, and analyzed the intracellular currents in the duodenal gland. The following results were obtained. A. Analysis of intracellular Ca^&lt;2+&gt; concentration in duodenal gland cells. Separation of duodenal gland cells. Concentration dependence (10^<-7>~ 10^<-5>M) of intracellular Ca^&lt;2+&gt; concentration ([Ca^&lt;2+&gt;] i). At rest, the Ca^&lt;2+&gt; i changes, the ACh changes, the time changes, the phase increases, and the Ca^&lt;2+&gt; changes are observed. ACh's reaction to pirenzepine and methoctamide has been affected, 4-DAMP has disappeared, and M3 receptors have been introduced. ACh [Ca^&lt;2+&gt;] i rises, Ca^&lt;2+&gt; is removed, Ca^&lt;2+&gt; is released, Ca^&lt;2+&gt; is released, Ca^&lt;2 +&gt; mobilization pathway is activated. Ca^&lt;2+&gt;-induced Ca^&lt;2+&gt; emission (CICR) is stimulated by Ca^&lt;2+&gt;-induced Ca ^&lt;2 +&gt; emission. The intracellular Ca^&lt;2+&gt; dynamics and the influence of Ca^&lt;2 +&gt; on the intracellular Ca^&lt;2+&gt; levels of the resource candidates (NOR, VIP, SP, motilin, neurotoxin, ATP) were investigated. SP's anti-reverse solution Ca^&lt;2+&gt; removes the influence of anti-reverse solution Ca ^&lt;2+&gt;. Analysis of membrane currents in B duodenal gland cells by the whole-cell membrane recording method As a result, the potential-dependent Ca^&lt;2+&gt; generation and the non-selective positive generation and current generation are observed. Hold potential 0mV, ACh, outward current is detected. A number of increases in current flow are observed at the same time. Hold potential of 0mV, and transient outward current of IP3 is generated. The results of this study include the activation of K+ in the duodenal gland, the activation of K + in the intracellular IP3 in the duodenal gland, and the stimulation of Ca^&lt;2+&gt; in the duodenal gland.

项目成果

Nagahata,H.et al.: "Fc Receptor-Mediuted Phagocytosis, Superoxide Production and calcium signaling of B2 integrin-deficient bovine neutrophils." Microbiology and Immunology. 41(9). 747-750 (1997)

Nagahata,H.et al.：“Fc 受体介导的 B2 整合素缺陷牛中性粒细胞的吞噬作用、超氧化物产生和钙信号传导。”