副腎髄質における細胞内Caストアの局在

肾上腺髓质细胞内钙储存的定位

• 批准号: 06760266
• 负责人: 寺岡 宏樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760266/
• 关键词: イノシトール3燐酸; カルシウムストア; カフェイン; クロム親和性細胞; タプシガルギン

^<45>Ca^<2+>トレーサーを用いて、ウシ副腎髄質由来の各種膜分画のCa^<2+>取り込み活性を観察した。β-エシチン高透過性細胞とホモジネートは2相性のATP依存性取り込みと、ATP非依存性取り込みの3種類の活性を示した。細胞内小器官としてミトコンドリア、ミクロゾーム、分泌顆粒がCa^<2+>取り込みを起こした。肝細胞などでCa^<2+>取り込み活性が報告されている核分画は有為な反応を示さなかった。細胞内小器官のマーカーとCa^<2+>取り込み活性の関係より、細胞静止レベルであるpCa7では小胞体とマーカーであるNADPHcytochrome c reductaseが、興奮レベルであるpCa6.1ではミトコンドリアのマーカーであるCytochrome c oxidaseが高い相関を示した。またATP非存在下で有意なCa^<2+>取り込みを起こしたのは分泌顆粒だけであった。Fura-2法を用いて、IP3およびカフェインによる各種膜分画のCa^<2+>放出活性を観察した。IP3は高透過性細胞およびホモジネートから濃度依存性(ED_<50>値 1.6-2.3x10^<-7>M)に一過性のCa^<2+>放出を起こした。IP3の作用は受容体との結合阻害薬であるヘパリンの存在により抑制された(IC_<50>値 2.2-3.3x10^<-5>M)。IP3はミクロゾーム分画から一過性のCa^<2+>放出を起こし、その濃度依存性およびヘパリン感受性とも高透過性細胞やホモジネートと類似していた。ミトコンドリアおよび分泌顆粒はIP3に対して全く反応しなかった。一方、カフェインは高透過性細胞、ホモジネートおよびミクロゾームから濃度依存性(ED_<50> 5mM)のCa^<2+>放出を起こしたが、ミトコンドリアや分泌顆粒には影響を与えなかった。IP3(2.5x10^<-6>M)の反復投与により反応が消失した後もカフェイン(10mM)はCa^<2+>放出を起こし、この逆も観察された。また、1μMタプシガルギン投与後もIP3およびカフェインの作用に殆ど影響を受けなかった。IP3およびライアジン受容体に対する結合実験は現在進行中である。以上の成績より、ウシ副腎髄質細胞におけるIP3およびカフェイン感受性のCa^<2+>ストアは小胞体であるが、両者は別々のコンパートメントに分かれているものと考えられる。この他、ミトコンドリアによる低親和性高容量のCa^<2+>取り込みと、分泌顆粒によるATP非依存性のCa^<2+>取り込みが存在するがそれらの存在意義については今後も検討が必要である。

^ < > 45 Ca ^ 2 + > < ト レ ー サ ー を with い て, ウ シ adrenal mass marrow origin points draw の の various membrane Ca ^ 2 + > < take り 込 み active を 観 examine し た. Beta エ シ チ ン high permeability cell と ホ モ ジ ネ ー ト は の ATP dependency take 2 photograph sex り 込 み と, ATP dependency take り 込 み の 3 kinds を の activity in し た. Intracellular small organ と し て ミ ト コ ン ド リ ア, ミ ク ロ ゾ ー ム, secretory granules が Ca ^ 2 + > < take り 込 み を up こ し た. Liver cells な ど で Ca ^ 2 + > < take り 込 が み activity report さ れ て い る nuclear points draw は for な anti 応 を shown さ な か っ た. Intracellular small organ の マ ー カ ー と Ca ^ 2 + > < take り 込 み active の masato is よ り, cells still レ ベ ル で あ る pCa7 で は small cell body と マ ー カ ー で あ る NADPHcytochrome c Reductase が, excited レ ベ ル で あ る pCa6.1 で は ミ ト コ ン ド リ ア の マ ー カ ー で あ る Cytochrome c oxidase が high い phase masato を shown し た. In the absence of またATP, で intentionally なCa^<2+> takes また 込みを to start <s:1> だけであった た <s:1> だけであった secretory granules だけであった. The Fura-2 method を uses を て, IP3およびカフェ, <s:1> による による and various membranes to subplot <s:1> Ca^<2+> and release active を観 to observe た. IP3 は high permeability cell お よ び ホ モ ジ ネ ー ト か ら concentration dependence (ED_ < > 50 nt 1.6 2.3 x10 ^ < - > 7 M) に transient の Ca ^ 2 + > < release を up こ し た. Action IP3 の は get let body と の combining resistance against 薬 で あ る ヘ パ リ ン の is に よ り inhibit さ れ た IC_ (2.2 3.3 x10 < > 50 numerical ^ < - > 5 M). IP3 は ミ ク ロ ゾ ー ム points draw か ら transient の Ca ^ 2 + < > release を up こ し, そ の concentration dependence お よ び ヘ パ リ ン susceptibility と も high permeability cell や ホ モ ジ ネ ー ト と similar し て い た. The ドリアおよび トコ ドリアおよび ドリアおよび secretes the granule トコ IP3に against the て total く of the 応 応 な った った った った. Party, カ フ ェ イ ン は high permeability cell, ホ モ ジ ネ ー ト お よ び ミ ク ロ ゾ ー ム か ら concentration dependence (ED_ (50 > 5 mm) の Ca ^ 2 + > < release を up こ し た が, ミ ト コ ン ド リ ア や secretory granules に は influence を and え な か っ た. IP3 (2.5 x10 ^ < - > 6 M) の vote again and again with に よ り anti 応 が disappear し た after も カ フ ェ イ ン は Ca (10 mm) ^ 2 + > < release を up こ し, こ の inverse も 観 examine さ れ た. The effects of また, 1μMタプシガ タプシガ ギ ギ ギ <e:1> and <s:1> followed by <s:1> IP3およびカフェ <s:1> に に almost <s:1> を を are affected by けな を った. IP3およびラ アジ アジ に acceptor に する binding experiment アジ is currently underway である. Above の achievement よ り, ウ シ adrenal marrow stromal cells に お け る IP3 お よ び カ フ ェ イ ン susceptibility の Ca ^ 2 + > < ス ト ア は small cell body で あ る が, struck は don't 々 の コ ン パ ー ト メ ン ト に points か れ て い る も の と exam え ら れ る. こ の him, ミ ト コ ン ド リ ア に よ る low affinity and high capacity の Ca ^ 2 + > < take り 込 み と, secretory granules に よ る ATP non dependency の Ca ^ 2 + > < take り 込 み が exist す る が そ れ ら の sense に つ い て は future も beg が 検 necessary で あ る.

项目成果

Hiroki Teraoka: "Inhibitory effects of caffein ond other methylxanthines on Ca^<2+> mobilizution and histamine secretion independent of CAMP in rat mast cells." Japanese Journal of Pharmacology. (in press). (1995)

Hiroki Teraoka：“咖啡因和其他甲基黄嘌呤对大鼠肥大细胞中 Ca^2 动员和组胺分泌的抑制作用与 CAMP 无关。”

Yoshikazu Nakazato: "Inhibitory effects of caffeine on secretagogue-induced catecholamine secretion from adrenal chromaffin cells of the guinea-pig." British Journal of Pharmacology. 111. 935-941 (1994)

Yoshikazu Nakazato：“咖啡因对促泌剂诱导的豚鼠肾上腺嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的抑制作用。”

Tetsuro Taneike: "Binding and functional characterization of alpha-2 adrenoceptors in isolated swine myometrium." Journal of Autonomic Pharmacology. (in press).

Tetsuro Taneike：“离体猪子宫肌层中 α-2 肾上腺素受体的结合和功能表征。”