副腎髄質における細胞内Caストアの局在

肾上腺髓质细胞内钙储存的定位

基本信息

批准号：
06760266
负责人：
寺岡宏樹
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Rakuno Gakuen University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

^<45>Ca^<2+>トレーサーを用いて、ウシ副腎髄質由来の各種膜分画のCa^<2+>取り込み活性を観察した。β-エシチン高透過性細胞とホモジネートは2相性のATP依存性取り込みと、ATP非依存性取り込みの3種類の活性を示した。細胞内小器官としてミトコンドリア、ミクロゾーム、分泌顆粒がCa^<2+>取り込みを起こした。肝細胞などでCa^<2+>取り込み活性が報告されている核分画は有為な反応を示さなかった。細胞内小器官のマーカーとCa^<2+>取り込み活性の関係より、細胞静止レベルであるpCa7では小胞体とマーカーであるNADPHcytochrome c reductaseが、興奮レベルであるpCa6.1ではミトコンドリアのマーカーであるCytochrome c oxidaseが高い相関を示した。またATP非存在下で有意なCa^<2+>取り込みを起こしたのは分泌顆粒だけであった。Fura-2法を用いて、IP3およびカフェインによる各種膜分画のCa^<2+>放出活性を観察した。IP3は高透過性細胞およびホモジネートから濃度依存性(ED_<50>値 1.6-2.3x10^<-7>M)に一過性のCa^<2+>放出を起こした。IP3の作用は受容体との結合阻害薬であるヘパリンの存在により抑制された(IC_<50>値 2.2-3.3x10^<-5>M)。IP3はミクロゾーム分画から一過性のCa^<2+>放出を起こし、その濃度依存性およびヘパリン感受性とも高透過性細胞やホモジネートと類似していた。ミトコンドリアおよび分泌顆粒はIP3に対して全く反応しなかった。一方、カフェインは高透過性細胞、ホモジネートおよびミクロゾームから濃度依存性(ED_<50> 5mM)のCa^<2+>放出を起こしたが、ミトコンドリアや分泌顆粒には影響を与えなかった。IP3(2.5x10^<-6>M)の反復投与により反応が消失した後もカフェイン(10mM)はCa^<2+>放出を起こし、この逆も観察された。また、1μMタプシガルギン投与後もIP3およびカフェインの作用に殆ど影響を受けなかった。IP3およびライアジン受容体に対する結合実験は現在進行中である。以上の成績より、ウシ副腎髄質細胞におけるIP3およびカフェイン感受性のCa^<2+>ストアは小胞体であるが、両者は別々のコンパートメントに分かれているものと考えられる。この他、ミトコンドリアによる低親和性高容量のCa^<2+>取り込みと、分泌顆粒によるATP非依存性のCa^<2+>取り込みが存在するがそれらの存在意義については今後も検討が必要である。

使用A^<45> Ca^<2+>示踪剂，观察到了从牛肾上腺髓质得出的各种膜级分的Ca^<2+>吸收活性。 β-ECITHIN高可渗透细胞和匀浆显示了三种类型的活性：双相依赖性ATP摄取和非ATP独立摄取。线粒体，微粒体和分泌颗粒作为细胞内细胞器引起Ca^<2+>摄取。据报道，在肝细胞等中具有CA^<2+>摄取活性的核馏分没有明显的反应。基于细胞内细胞器的标记与Ca^<2+>摄取活性之间的关系，内质网和标记物纳德球色素c还原酶在PCA7上高度相关，这是细胞静止水平，即线粒体标记物cytocrome cytocrome Coxidase pca and pca and pca and pca7 and corlelial and corelly and pca7 and pca7是高度相关的激发水平。此外，在没有ATP的情况下，只有分泌颗粒才能进行大量的Ca^<2+>吸收。使用Fura-2方法，观察到IP3和咖啡因引起的各种膜级分的Ca^<2+>释放活性。 IP3引起瞬态Ca^<2+>以浓度依赖性的方式从高度渗透的细胞中释放（ED_ <50>值1.6-2.3x10^<-7> m）。 IP3的效果通过肝素的存在抑制（IC_ <50>值2.2-3.3x10^<-5> m）抑制。 IP3导致瞬时Ca^<2+>从微粒体馏分中释放，其浓度依赖性和肝素敏感的特性类似于高度可渗透的细胞和匀浆。线粒体和分泌颗粒根本没有对IP3做出反应。另一方面，咖啡因引起浓度依赖性（ED_ <50> 5mm）Ca^<2+>从高度渗透的细胞，匀浆和微粒体中释放，但对线粒体或分泌颗粒没有影响。咖啡因（10 mm）在重复给药IP3（2.5x10^<-6> m）后继续引起Ca^<2+>，反之亦然。此外，即使在1μmthapsigargin给药后，IP3和咖啡因的作用也几乎不影响。 IP3和Raizine受体的结合实验目前正在进行中。基于上述结果，据信牛肾上腺髓质细胞中的IP3-和咖啡因敏感的Ca^<2+>商店是内质网，但两者分为单独的隔室。此外，线粒体和非依赖ATP的Ca^<2+>摄取较低的高容量Ca^<2+>由分泌颗粒的吸收摄入，但将来需要研究其存在的重要性。