mi転写因子(MITF)により転写活性化を受ける遺伝子群の包括的クローニング

mi转录因子（MITF）转录激活基因的全面克隆

• 批准号: 09770147
• 负责人: 伊藤 彰彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770147/
• 关键词: 転写因子; サブトラクション; グランザイムB; セロトニン; mi遺伝子; プロモーター; マスト細胞; MITF

マウスmi遺伝子座にはbasic-helix-loop-helix-leucine zipper型転写囚子MITFがコードされている。mi遺伝子座におけるmi変異のホモ個体mi/miマウスでは塩基領域の1アルギニンが欠失した変異型MITFが発現している。この蛋白は転写因子として機能できないため、mi/miマウスではMITFによる遺伝子の転写活性化が起こらない。これら転写障害を受ける遺伝子を単離するために、野生型(+/+)及びmi/miマウス由来培養マスト細胞からcDNAライブラリーを作製し、(+/+-mi/mi)のサブトラクションを行った。cDNAプローブによるサザン法で約400クローンをスクリーニングし、mi/miマウス由来培養マスト細胞で転写障害を示す遺伝子20種を単離した。塩基配列を決定した所、12種は未知の遺伝子で、8種はグランザイムB、トリプトファン水酸化酵素、gp49、ST2L、ビメンチン、E25、マウスマスト細胞プロテアーゼ5及び6であった。グランザイムBとトリプトファン水酸化酵素についてはMITFの直接的な転写標的遺伝子であることをゲル・シフト法及びルシフェラーゼ・アッセイにより示した。これら2遺伝子のプロモーター領域内に存在するそれぞれ3つ及び1つのCANNTGモチーフがMITFによる転写活性化に重要であった。またこれら2遺伝子はそれぞれ細胞障害活性及びセロトニン合成に重要な蛋白をコードしているが、mi/miマウス由来培養マスト細胞ではYAC-1細胞に対する細胞障害活性及び細胞当たりのセロトニンの含量が有意に低下していた。

Youdaoplaceholder0 ウスmi 伝 substal に に basic-helix-loop-helix-leucine zipper 転 writing substal MITFがコ ドされて ドされて る る. Mi heritage 伝 stroma に お け る mi - different の ホ モ individual mi/mi マ ウ ス で は salt base areas の 1 ア ル ギ ニ ン が owe lost し た - alien MITF が 発 now し て い る. こ の protein は planning write factor と し て function で き な い た め, mi/mi マ ウ ス で は MITF に よ る heritage 伝 son の planning write activeness が up こ ら な い. こ れ ら planning write handicap of を by け る posthumous son 伝 を 単 from す る た め に, wild type (+ / +) and び mi/mi マ ウ ス origin training マ ス ト cells か ら cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, (+ / + - mi mi) の サ ブ ト ラ ク シ ョ ン を line っ た. CDNA プ ロ ー ブ に よ る サ ザ ン method about 400 ク で ロ ー ン を ス ク リ ー ニ ン グ し, mi/mi マ ウ ス origin training マ ス ト cells で planning write handicap of を shown す heritage 伝 sub 20 を 単 from し た. Salt base with column を decided し た, 12 は by unknown の heritage 伝 で, eight は グ ラ ン ザ イ ム B, ト リ プ ト フ ァ ン acidic enzyme, gp49, ST2L, ビ メ ン チ ン, E25, マ ウ ス マ ス ト cells プ ロ テ ア ー ゼ 5 and 6 で び あ っ た. グ ラ ン ザ イ ム B と ト リ プ ト フ ァ ン acidic enzyme に つ い て は MITF の direct な heritage planning write mark 伝 son で あ る こ と を ゲ ル · シ フ ト method and び ル シ フ ェ ラ ー ゼ · ア ッ セ イ に よ り shown し た. Son こ れ ら 2 heritage 伝 の プ ロ モ ー タ ー に exist within the territory す る そ れ ぞ れ 3 つ and び 1 つ の CANNTG モ チ ー フ が MITF に よ る planning write activeness に important で あ っ た. ま た こ れ ら 2 heritage 伝 son は そ れ ぞ れ cells handicap of activity and び セ ロ ト ニ ン important な protein synthesis に を コ ー ド し て い る が, mi/mi マ ウ ス origin training マ ス ト cells で は YAC - 1 cell に す seaborne る cells handicap of activity and び cells when た り の セ ロ ト ニ ン の content low が intentionally に し て い た.

项目成果

Ito A et al: "Enhanced expression of CD34 messenger RNA by developing endothelial cells of mice." Lab Invest. 72. 532-538 (1995)

Ito A 等人：“通过小鼠内皮细胞的发育增强 CD34 信使 RNA 的表达。”

Ito A et al: "Expression of vascular permeability factor(VPF/VEGF)messenger RNA by plasma cells." Pathol Int. 45. 715-720 (1995)

Ito A 等人：“浆细胞表达血管通透因子 (VPF/VEGF) 信使 RNA。”

Ito A: "Systematic Method to Obtain Novel Genes Thac Are Regulated by mi Transoripon Factor:Impaired Expression of Granzyme B and Tryptophan Hydroxylase in mi/mi Cultured Most Cells" Blood. (in press).

Ito A：“获得 mi Transoripon 因子调节的新基因的系统方法：mi/mi 培养的大多数细胞中颗粒酶 B 和色氨酸羟化酶的表达受损”血液。

Ito A et al: "Systematic method to obtain novel genes that are regulated by mi transcription factor." Blood. 91. 3210-3221 (1998)

Ito A 等人：“获得 mi 转录因子调控的新基因的系统方法。”

Ito A et al: "Inhibitary effect of the transcription factor encoded by the mi mutant alkle in cultured mast cells of mice." Blood. in press.

Ito A 等人：“mi 突变体 alkle 编码的转录因子对培养的小鼠肥大细胞的抑制作用。”