トリパノソーマにおける化学療法剤開発の標的としてのトランスアミダーゼの解析

转酰胺酶作为锥虫化疗药物开发靶标的分析

• 批准号: 13226073
• 负责人: 永宗 喜三郎
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226073/
• 关键词: トリパノソーマ; GPIアンカー; トランスアミダーゼ

申請者らはGPIをタンパク質に結合させる酵素であるGPIトランスアミダーゼのコンポーネントの一つであるGPI8のトリパノソーマオルソログ、TbGPI8をクローニングした。そこで、トリパノソーマトランスアミダーゼの他のコンポーネントを同定するため、TbGPI8にエピトープタグをつけてトリパノソーマにトランスフェクトし、免疫沈降によりTbGPI8と共沈してくるタンパク質を解析したところ、70,40,35kDaの3種のタンパク質(P70,P40,P35)を同定することができた。これらのうちP40については、遺伝子をクローニングし、更にプロサイクリック型トリパノソーマにおいてノックアウトを行った。その結果、P40はTbGPI8と同様、トランスアミダーゼのコンポーネントとして機能していることが証明できた。また、P40と同様P35遺伝子の全長もクローニングできた。更にTbGPI8との共沈実験では同定できなかったが、ヒトや酵母でトランスアミダーゼのコンポーネントとして知られているGAA1のトリパノソーマにおけるホモログをトリパノソーマゲノムデータベースより見出し、クローニングした。今回新たに同定できたP40及びP35のアミノ酸配列は、哺乳動物や酵母のトランスアミダーゼの既知のコンポーネントと相同性が認められず、またデータベース上にも、トリパノソーマ科の生物にオルソログが見いだせた以外にホモログや有意にホモロジーを有するタンパク質が認められないことから、これらのタンパク質はトリパノソーマ科の生物のトランスアミダーゼに特異的なタンパク質であると考えられた。従って、トリパノソーマにおけるトランスアミダーゼの分子組成は哺乳動物や酵母のそれと全く異なっている可能性が示唆され、トリパノソーマのトランスアミダーゼは抗トリパノソーマ薬開発の非常に有効な標的になると考えられた。

Applicants ら は GPI を タ ン パ ク qualitative に combining さ せ る enzyme で あ る GPI ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の コ ン ポ ー ネ ン ト の a つ で あ る GPI8 の ト リ パ ノ ソ ー マ オ ル ソ ロ グ, TbGPI8 を ク ロ ー ニ ン グ し た. そ こ で, ト リ パ ノ ソ ー マ ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の he の コ ン ポ ー ネ ン ト を with fixed す る た め, TbGPI8 に エ ピ ト ー プ タ グ を つ け て ト リ パ ノ ソ ー マ に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, immune sink に よ り TbGPI8 と shen total し て く る タ ン パ ク qualitative analytical し を た と こ ろ, 70,40,35 kDa の Three kinds of <s:1> タ, パ, パ and た (P70,P40,P35)を are the same as する, する, とがで, た, た. こ れ ら の う ち P40 に つ い て は, but 伝 を ク ロ ー ニ ン グ し, more に プ ロ サ イ ク リ ッ ク type ト リ パ ノ ソ ー マ に お い て ノ ッ ク ア ウ ト を line っ た. そ の results, P40 は TbGPI8 と with others, ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の コ ン ポ ー ネ ン ト と し て function し て い る こ と が prove で き た. Youdaoplaceholder0, P40と, the same as P35, 伝, the full length of the 伝, また ロ, ニ, グで, た, た. More に TbGPI8 と の total shen be 験 で は with fixed で き な か っ た が, ヒ ト や yeast で ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の コ ン ポ ー ネ ン ト と し て know ら れ て い る GAA1 の ト リ パ ノ ソ ー マ に お け る ホ モ ロ グ を ト リ パ ノ ソ ー マ ゲ ノ ム デ ー タ ベ ー ス よ り see し, ク ロ ー ニ ン グ し た. Now back to new た に with fixed で き た P40 and び P35 の ア ミ ノ acid with column は, mammals や yeast の ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の already know の コ ン ポ ー ネ ン ト と identity が recognize め ら れ ず, ま た デ ー タ ベ ー ス on に も, ト リ パ ノ ソ ー の マ families に オ ル ソ ロ グ が see い だ せ た outside に ホ モ ロ グ や intentionally に ホ モ ロ ジ ー を す る タ ン パ ク qualitative が recognize め ら れ な い こ と か ら, こ れ ら の タ ン パ ク qualitative は ト リ パ ノ ソ ー の マ families の ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ に specific な タ ン パ ク qualitative で あ る と exam え ら れ た. 従 っ て, ト リ パ ノ ソ ー マ に お け る ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ の molecules は mammals や yeast の そ れ と く all different な っ て い が る possibility in stopping さ れ, ト リ パ ノ ソ ー マ の ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ は resistance ト リ パ ノ ソ ー マ 薬 open 発 の very に have sharper な mark に な る と exam え ら れ た.

项目成果

永宗 喜三郎, 木下 タロウ: "抗原虫薬開発の標的としてのGPIアンカー生合成経路"蛋白質核酸酵素. 47(1). 30-36 (2002)

Kisaburo Nagamune、Taro Kinoshita：“GPI 锚定生物合成途径作为抗原虫药物开发的目标”蛋白质核酸酶 47(1)。