血流型トリパノソーマにおけるGPI生合成能欠失による致死性の解析

血流锥虫 GPI 生物合成缺陷致死率分析

• 批准号: 14770108
• 负责人: 永宗 喜三郎
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770108/
• 关键词: トリパノソーマ; GPIアンカー; GPIトランスアミダーゼ; トランスシアリダーゼ; シアル酸; ツェツェバエ

Trypanosoma bruceiにおいてGPIアンカーの3番目のマンノース転移に関与する遺伝子TbGPI10及びGPIアンカーをタンパク質に結合させる酵素であるGPIトランスアミダーゼのサブユニットの1つTbGPI8を、媒介昆虫であるツェツェバエの中腸内でのステージであるプロサイクリック型においてノックアウトし、ツェツェバエ中腸内での増殖能を検討した。TbGPI10ノックアウト変異株(10KO)は野生株の約半分の感染性を保持していたのに対し、TbGPI8ノックアウト変異株(8KO)はツェツェバエ内での増殖能がほとんど失われていた。この現象を理解するため、GPIアンカー型タンパク質の一つであるトランスシアリダーゼに着目しその挙動を解析したところ8KOでトランスシアリダーゼ活性はほとんど消失してしまっていたのに対し、10KOでは培地中に分泌される形で検出された。更にこれらのトリパノソーマの表面に存在するシアル酸を定量した結果、10KOは野生株の約半分、8KOでは検出限界以下と、細胞表面のシアル酸量はトランスシアリダーゼ活性と、またツェツェバエへの感染能とよく相関する結果が得られた。また最近トリパノソーマ表面にはGPIアンカー型タンパク質以外にタンパク質"フリー"のGPIが存在することが明かとなったので、各変異株よりそれらを精製し構造を解析したところ、やはり8KO表面のGPIにはシアル酸が付加されていないことがわかった。そこで8KOにGPIシグナルペプチドを持たない分泌型変異トランスシアリダーゼを導入したところ、細胞表面のシアル酸及びツェツェバエへの感染性の両方が回復した。以上の結果よりトリパノソーマのツェツェバエへの感染には表面をコートしているタンパク質であるプロサイクリンによるコートよりむしろ、glycocalyx部分とそのシアル酸による修飾の方が重要であると考えられた。

Trypanosoma brucei contains GPI and its three components, which are related to migration and transfer, and TbGPI10 and GPI. GPI and its three components are related to quality and combination. GPI and its three components are related to enzyme. GPI and its three components are related to TbGPI8 and vector insects. The infectivity of TbGPI10 (10KO) was maintained at about half of that of the wild strain, while that of TbGPI8 (8KO) was maintained at about half of that of the wild strain. This phenomenon is understood by the following: 1. GPI loss Type: 1. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI Loss Type: 2. GPI Loss Type: 1. GPI In addition, the results of quantitative analysis of the presence of acid on the surface of the plant showed that the concentration of acid on the surface of the plant was about half that of wild plants, and the concentration of acid on the surface of the plant was about half that of wild plants, and the concentration of acid on the surface of the plant was about half that of wild plants. The most recent GPI is the type of GPI other than the type of GPI that exists. The most recent GPI is the type of GPI that exists. The most recent GPI is the type of GPI that exists. The most recent GPI is the type of GPI that exists. 8. The GPI gene was introduced into the cell surface and the infectivity was restored. The above results show that the surface of the dye can be modified by the method of modification, and the glycocalyx can be modified by the method of modification.

项目成果

Nagamune, K.et al.: "GPI transamidase of Trypanosoma brucei has two previously uncharacterized (trypanosomatid transamidase1 and 2) and three common subunits."Proc.Natl.Acad.Asc.USA. 100. 10682-10687 (2003)

Nagamune, K. 等人：“布氏锥虫的 GPI 转酰胺酶具有两个以前未表征的（锥虫转酰胺酶 1 和 2）和三个常见亚基。”Proc.Natl.Acad.Asc.USA。

K.Ohishi, K.Nagamune, Y.Maeda, T.Kinoshita: "Two subunits of GPI transamidase GPI8 and PIG-T form a functionally important intermolecular disulfide bridge"J. Biol. Chem.. (in press).

K.Ohishi、K.Nagamune、Y.Maeda、T.Kinoshita：“GPI 转酰胺酶 GPI8 和 PIG-T 的两个亚基形成功能重要的分子间二硫桥”J.