Menkes病の遺伝子解析とその臨床応用

门克斯病的基因分析及其临床应用

• 批准号: 06670829
• 负责人: 児玉 浩子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670829/
• 关键词: Menkes病; 遺伝子解析; 銅代謝; 銅転送ATPase; 保因者診断; 胎内診断

メンケス病はX染色体劣性遺伝形式の先天性銅代謝異常症である。本症患者細胞は銅を蓄積する病態を示し、その病因はcopper transporting ATPase(メンケス蛋白)をコードする遺伝子の異常およびこの蛋白の欠損とされている。私たちは本邦のメンケス病患者の皮膚線維芽細胞またはEB形質転換リンパ球を用いて、その生化学的、免疫酵素学的検討および遺伝子解析を行なった。通常培地および銅添加培地で培養した細胞の銅濃度は5症例のメンケス病患者細胞ではそれぞれ123、170ng/mg蛋白であり、正常対照の29、53に比べ著明に高値であった。メンケス病患者の母の細胞の銅濃度は95、119ng/mg蛋白とメンケス病患者と正常の中間値を示し、銅濃度測定でも保因者診断が可能であると結論が出来た。次に患者細胞でのメンケス蛋白の存在の有無を検討した。方法は細胞溶液をSDS電気泳動し、ウェスタンブロット法でゲル上の蛋白を膜に転写し、メンケス蛋白に対するポリクローナル抗体を用いてメンケス蛋白を検出した。その結果正常ヒト細胞では200kDaの位置にメンケス蛋白と思われる蛋白のバンドが検出されたが、メンケス病患者細胞ではいずれの症例もこのバンドは検出されなかった。このことより、本症患者細胞ではメンケス蛋白が欠損しているといえた。しかし保因者であるメンケス病患者母親の細胞ではメンケス蛋白は検出された。したがってメンケス蛋白の免疫学的方法で本症患者の診断は可能であるが、保因者の診断は出来ないと考えられた。遺伝子解析は、今回ノーザンブロット法で検討した。メンケス遺伝子のmRNAは正常細胞では検出されたが、メンケス病患者細胞では検討したすべての症例で検出されなかった。すなわち本症患者細胞ではメンケス遺伝子は発現しておらず、メンケス蛋白も合成されていないと判断できた。今後本症患者でのメンケス遺伝子の欠失や点変異をサザンブロット法やPCR-SSCP法で検討し、遺伝子診断法を確立し、臨床に適用したいと考えている。

Minato disease is a form of congenital abnormality of copper metabolism in the X-chromosome defective form. The accumulation of copper in the cells of patients with this disease shows signs of morbidity and the cause of the disease is copper transporting. ATPase(メンケスprotein)をコードする伝子のAbnormalityおよびこのproteinの无码とされている. The patient's skin line vitreous bud cells of the patient's disease are changed into EB-shaped morphological changes. The ball is analyzed by the 検検および缝子 in biochemistry and immunoenzyme. Usually copper is added to the cultured cells and the copper concentration is used in the cells of patients with 5 cases of disease.れ123, 170ng/mg protein であり, normal 対色の29, 53 に べ 明に高値 であった. The copper concentration in mother cells of patients with Myodonitis disease is 95, and the protein of 119ng/mg is the normal intermediate value in patients with Myodonitis disease. The copper concentration measurement is not possible for the diagnosis of maintainers, and the conclusion is drawn. The patient's cells are tested for the presence or absence of the protein. Methods: Cell solution, SDS electrophoresis, protein electrophoresis method, protein membrane on the cell solution Write し、メンケスproteinに対するポリクローナルantibodyを Use いてメンケスproteinを検出した.そのResults are normalヒトcellでは200kDaのpositionにメンケスproteinと思われるproteinのバンドが検出されたが, メンケス disease patient cell ではいずれの symptom case 検出されなかった.このことより、The cells of patients with this disease are damaged due to protein deficiency.しかし心者であるメンケス Disease patient's mother's cell ではメンケスprotein は検出された. It is possible to diagnose patients with this disease using immunological methods, and it is possible to diagnose patients with the disease and to diagnose patients who are immune to the disease. The analysis of the legacy is done, and the method of the present chapter is discussed.メンケス缝子のmRNAはNormal cellsでは検出されたが、メンThe patient's cells are the same as those of patients with the disease. In patients with this disease, the cell ではメンケス缝子は発appears しておらず, and the メンケスprotein もsynthesizes されていないと Judgment できた. From now on, patients with this disease will continue to use PCR- The SSCP method has not been discussed, the diagnosis method of posthumous syndrome has not been established, and the clinical application has not been tested yet.

项目成果

児玉 浩子: "Menkes病患者細胞でのMenkes蛋白の免疫学的検討" 脳と発達. (発表予定).

Hiroko Kodama：“门克斯病患者细胞中门克斯蛋白的免疫学研究”《大脑与发育》（待提交）。