細胞周期関連遺伝子導入法を用いた食道扁平上皮癌の転移機序の解明と治療への応用
利用细胞周期相关基因转移方法阐明食管鳞癌的转移机制及其在治疗中的应用
基本信息
- 批准号:09770957
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1. ベクターとしてブラスミドpcDNA3にヒト野生型p16遺伝子を組み込んだブラスミド pCDKN2WTと,コントロールとしてPcDNA3を用いた.pCDKN2WT,pcDNA3を大腸菌内で増殖させ,これらを抽出した.大腸菌より抽出したpCDKN2WTは制限酵素を用いて,p16遺伝子が含まれていることを確認した.2. Lipofection法を用いて発現株(COS7)に遺伝子導入を行い,westen blotting法によりp16発現を確認した.次いで食道扁平上皮癌細胞株TE series(TE2,6,8,9)に遺伝子導入を行い,TE6,TE8でWestern blotting法によりその発現を確認した.3. p16遺伝子導入株(pCDKN2WT導入株)はp16遺伝子欠失株(pcDNA3を導入した親株)より増殖速度が遅くなる傾向にあった.4. p16遺伝子導入株とp16遺伝子欠失株に対する各種抗癌剤(CDDP,ADR,5-FU)感受性を比較検討したところ,P16遺伝子導入株でより細胞増殖が抑制される傾向にあった.しかし,Lipofection法によるp16遺伝子導入は導入効率が一定でないため,今後より安定した発現株の作成が不可欠である.5. ヒト食道扁平上皮癌臨床検体33例におけるp16発現異常と化学放射線療法の効果との相関を免疫組織学的に検討したところ,p16発現を認める症例で化学放射線療法が著効する傾向にあった.in vivoにおいてもp16遺伝子導入により抗癌剤感受性が上昇することが期待される.6. 今後,p16遺伝子導入細胞とp16遺伝子欠失細胞の浸潤能の変化をin vasionassayを用いて測定し,腫瘍細胞のもつmalignant potentialを抑制する意味でのp16遺伝子導入の効果を検討する予定で準備を進めている.
1. pCDKN2WT, pcDNA3, pcDNA3, pcDNA E. coli pCDKN2 WT was isolated and identified as a restriction enzyme,p16 gene. Lipofection method was used to detect COS7, and wsten blotting method was used to detect p16. In addition, the gene expression of esophageal squamous cell carcinoma cell line TE series(TE2,6,8,9) was confirmed by Western blotting. p16 gene introduced plants (pCDKN2 WT introduced plants) and p16 gene deficient plants (pcDNA3 introduced plants) have a tendency to increase the propagation speed. Comparison of susceptibility to various anticancer agents (CDDP,ADR,5-FU) between p16 gene introduced strains and P16 gene deficient strains. The Lipofection Method p16 provides a constant introduction rate for the seed, and a stable plant can be created in the future. p16 gene expression in 33 cases of esophageal squamous cell carcinoma and its correlation with chemoradiotherapy efficacy Immunohistologic examination showed that p16 gene expression was associated with chemoradiotherapy efficacy in vivo. In the future,p16 gene introduced cells and p16 gene deficient cells have been tested in the vasion assay, and the inhibition of malignant potential in tumor cells means that p16 gene introduced cells have been studied in advance.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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