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骨芽細胞における新規石灰化関連チロシンホスファターゼ遺伝子の解明とクローニング

成骨细胞中新型矿化相关酪氨酸磷酸酶基因的阐明和克隆

基本信息

批准号：
09771528
负责人：
出山義昭
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771528/
关键词：
チロシンホスファターゼクローニング骨芽細胞石灰化

项目摘要

今年度は、骨芽細胞様MC3T3-El細胞をconfluence時ならびにconfluence後14日まで培養し細胞を回収してそのtotalRNAを抽出し、チロシンホスファターゼ遺伝子の発現の変化について検討を行った。○RT-PCR法によるチロシンホスファターゼ遺伝子の発現の解析チロシンホスファターゼ活性を示すコンセンサス配列からセンスならびにアンチセンスのプライマー数種類を設計し、培養各時期の骨芽細胞のtotalRNAから逆転写酵素を用いて合成したcDNAをPCRにより増幅した。その結果各時期におけるPCR産物が検出された。しかし、培養時期間の断片のサイズならびに発現量の違いは認められなかった。これらのPCR産物のうち現在のところクローニングされていないと考えられる産物についてその塩基配列について検討を行っている。!O培養各時期におけるチロシンホスファターゼ活性の変化の解析MC3T3-El細胞の分化過程においてチロシンホスファターゼ活性を有する数種類の酵素が粗精製された。これらの中には細胞の分化とともに活性が変動するものも認められ、チロシンホスファターゼが骨芽細胞の分化に関わっている可能性が示唆された。今後は生化学的ならびに分子生物学的手法の両方を用いたアプローチによりこれらの精製、さらにはクローニングを行い、チロシンホスファターゼが骨芽細胞の成長発達さらには石灰化とどのように関わっているかについて検索を行おうと考えている。

This year, MC3T3-El cells were cultured for 14 days after confluency, and the total RNA was extracted, and the development of the cells was discussed. RT-PCR analysis of gene expression, gene expression, gene activity, gene sequence, gene expression, gene expression PCR products were detected at various stages of the assay. During the cultivation period, the number of fragments and the number of occurrences are not recognized. The PCR products are now ready to be tested and the product is ready to be tested.! Analysis of enzyme activity during differentiation of MC3T3-El cells at various stages of culture The possibility of differentiation of bone bud cells is indicated by the change of activity of bone bud cells. In the future, the methods of biochemistry and molecular biology will be used to refine and refine the bone bud cells, and the growth of bone bud cells will be studied.