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骨型アルカリ性ホスファターゼ遺伝子発現を制御する転写因子群クローニング

控制骨型碱性磷酸酶基因表达的转录因子的克隆

基本信息

批准号：
11771133
负责人：
出山義昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

血清総アルカリ性ホスファターゼ(ALP)活性は以前より骨形成のマーカーとして臨床診断に用いられてきた。また、骨型ALPは骨芽細胞成熟のマーカーとされ、この活性の上昇が石灰化にとって非常に重要な意味を持つことが知られている。しかし、その機能は充分に判明しておらず、今後の研究の進展が待たれる。一方、転写因子の動向を知ることは、その転写因子が制御する遺伝子の発現を調節するシグナルを知る一つの指標となり、遺伝子の機能を知る上での手がかりとなりうる。本研究目的は、骨型ALP遺伝子を制御する新規の転写因子を調べることによって骨型ALPの機能の解析の一端を明らかにすることである。骨型ALP遺伝子のプロモーター領域からループを形成する塩基配列を検討し、この配列のオリゴヌクレオチドを用いて、マウス骨芽細胞様MC3T3-E1細胞の核タンパク質を抽出してゲルシフト分析を行ったところDNA結合活性が認められた。さらに、DNAに結合するタンパク質について明らかにするために、この配列を複数連結してアフィニティークロマトグラフィーを用いてタンパク質の精製を行ったところ3種類のタンパク質が精製された。今後は、この3種類のタンパク質についてアミノ酸配列の解析に充分な量が得られるまで精製を続け、アミノ酸配列を決定し、さらにDNA配列の解析を行って骨型ALPの発現を制御するシグナルの解析ならびに機能解析を行いたいと考えている。

Serum ALP activity is used in clinical diagnosis. The increase in activity of osteogenic ALP during maturation of osteogenic bud cells is very important for understanding the relationship between osteogenic ALP and calcification. The function of the system is fully identified, and the progress of future research is pending. The direction of a writing factor is known, and the writing factor is controlled, and the occurrence of a gene is regulated. The purpose of this study is to clarify the functional analysis of osteotype ALP by regulating the new writing factors of osteotype ALP gene. The DNA binding activity of bone bud cells and MC3T3-E1 cells was determined by DNA binding assay. DNA binding, DNA In the future, the analysis of acid alignment of these three types of proteins will be carried out in sufficient quantities to obtain the results of purification, determination of acid alignment, analysis of DNA alignment, control of bone-type ALP generation, analysis and functional analysis.