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OLETFラットにおけるインスリン非依存型糖尿病原因遺伝子のクローニング

OLETF 大鼠非胰岛素依赖型糖尿病基因的克隆

基本信息

批准号：
09780778
负责人：
山田宜永
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780778/
关键词：
OLETFラット NIDDM サブシラクション CCKAR 膵臓 OLETF subtraction cloning gene

项目摘要

OLETFラットにおけるインスリン非依存性糖尿宿原因遺伝子をクローニングするためにPCR-directed subtraction cloning法を実行した。10週令のOLETF及び対照ラットであるLETOの膵臓より調整されたcDNAをドライバーもしくはトレイサーのいずれかに設定し、過剰ドライバーcDNAとトレイサーcDNA間のハイブリダイゼーション及びドライバーcDNA鎖の除去というサブトラクションを3回繰り返すことでトレイサーcDNA中にのみ存在するcDNAを選抜した。この選抜cDNAPCR産物をプローブとして用いてドライバーcDNA及びトレイサーcDNAを転写したサザンブロットにハイブリダイゼーションさせたところ、ドライバーcDNA及びコントロールの膵RNAのノーザン解析を行ったところ、トレイサーが由来するRNAにより強くハイブリダイゼーションシグナルが観察されると判明した。これらの結果は今回のサブトラクション実験により、OLETFラットの膵臓でコントロールに比べ発現が上昇あるいは減少しているcDNA群が調整されたことを示している。さらに、これらの選抜cDNAPCR産物はpBluescriptベクターにサブクローニングされ、外来インサートDNAとして選抜PCR産物を含むプラスミドが〜100個単離された。これら選抜PCR産物の中に、OLETFラットで生じるインスリン非依存性糖尿病の原因遺伝子となるものもしくはその原因遺伝子の下流で機能を発揮する二次的遺伝子が含まれると考えられる。

PCR-directed subtraction cloning is implemented in OLETF. 10-week OLETF and the corresponding LETO cDNA were tuned to the position of the cDNA in the middle of the screen, and the cDNA in the middle of the screen was set to the position of the cDNA in the middle of the screen. This selection of cDNA PCR products is based on the analysis of cDNA and RNA from different sources. As a result, the number of cDNA fragments increased and the number of cDNA fragments decreased. In this case, the number of PCR products from selected cDNA fragments was ~ 100, including pBluescript and foreign DNA fragments. This selection of PCR products in the middle, OLETF gene production, independent of the cause of diabetes gene, and other causes of gene downstream function to play a secondary gene to contain the test.