小児悪性骨軟部腫瘍に対する遺伝子治療の基礎的研究

小儿恶性骨与软组织肿瘤基因治疗的基础研究

• 批准号: 10770709
• 负责人: 大野 貴敏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770709/
• 关键词: ユーイング肉腫; 横紋筋肉腫; キメラ遺伝子; アンチセンス; リボザイム; 遺伝子治療; EWS; PAX3; FKHR

1) EWS/Fli-1、PAX3/FKHRのアンチセンスオリゴDNAのユーイング肉腫細胞、横紋筋肉腫細胞に対する抗腫瘍効果の検討各キメラ遺伝子のmRNAに特異的に結合させるため、アンチセンスオリゴをキメラ遺伝子のfusion pointを含むように作成しHPLCにて精製した。オリゴDNAを最終濃度5-50μMの範囲でリボゾームと共にEWS/Fli1を発現するユーイング肉腫細胞あるいはPAX3/FKHRを発現する横紋筋肉腫細胞に細胞に投与し、細胞増殖抑制能を検討したところ、30-60%の増殖抑制率が得られた。2) リボザイムのユーイング肉腫、横紋筋肉腫細胞に対する抗腫瘍効果の検討各キメラ遺伝子のfusion point近傍を切断するリボザイムを作成し、RNA切断活性、細胞増殖抑制効果を検討した。a) ハンマーヘッド型のリボザイムを合成し、キメラ遺伝子発現ブラスミドよりin vitroで合成したmRNAの切断能を検討したところ、理論通り、効率よく切断可能であった。b) リボザイムをユーイング肉腫、横紋筋肉腫細胞にトランスフェクションし、細胞増殖抑制効果を検討したところ60-80%の抑制率が得られ、アンチセンスの抑制率を上回った。c) ヌードマウスにユーイング肉腫細胞を移植し、腫瘍形成後にアンチセンスとリボザイムを局所投与し抗腫瘍効果を検討したところ、コントロールに比較し、腫瘍増大速度を抑制する結果を得た。現在さらに実験回数を重ね、検討中である。

1)EWS/Fli-1, PAX3/FKHR gene fusion point analysis of anti-tumor effect of EWS/Fli-1, PAX3/FKHR gene fusion point analysis and HPLC purification The final concentration of DNA in the range of 5-50μM was significantly higher than that of PAX3/FKHR, and the inhibition rate of proliferation was 30-60%. 2)A study of anti-tumor effect of cell culture in the vicinity of fusion point of each cell culture, RNA cleavage activity and cell proliferation inhibition effect. a) The expression of mRNA in vitro can be detected by means of theoretical analysis, and the expression of mRNA in vitro can be detected by means of efficiency analysis. b) The inhibition rate of 60-80% was obtained and the inhibition rate of 60-80% was increased. c) The results of the study on tumor cell transplantation and tumor growth inhibition were obtained. Now, we're going to have to go back to work.