Arylhydrocarbon receptor の細胞内機能の解析

芳基烃受体的细胞内功能分析

• 批准号: 10771330
• 负责人: 生田 統悟
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771330/
• 关键词: ダイオキシン; Ah レセプター; PAS蛋白質; シヤトル蛋白質; シャトル蛋白質; CYPIAI

1.免疫染色によるAh receptor 細胞内局在の解析我々はAh receptor の細胞内局在を制御しているシグナル配列を決定するため、この配列を含む短いペプチド配列とGST-GFPとの融合タンパクを用いて解析をおこなってきた。本年度は細胞に発現させた全長AhRの局在様式を解析する為、Hisタグを融合したAhRの細胞内局在を、蛍光抗体による細胞染色で調べた。マウスHepa1c1c7細胞でHis-AhRを一過性に発現させた。コントロール細胞で主に細胞質に局在したのに対し、AhRリガンドであるメチルコランスレン(MC)処理すると核に局在した。一方、核外移行を阻害するレプトマイシンで処理によっても核局在が観察された。これらより、全長のAhRタンパク質についても核ー細胞質間を往復していることが示された。2.細胞内シグナル伝達系によるAhRの活性調節AhRの活性は細胞に内在するリガンドによって調節されていると考えられるが、ステロイドホルモン受容体や他の核内受容体で観察されているように、リン酸化などを介したシグナル伝達経路によっても制御されている可能性がある。そこで、細胞内シグナル伝達に重要な役割をもつRasタンパク質のAhR活性への影響を、AhR/ARNTが認識するXRE配列およびCYP1A1の5 '上流領域を連結したLuciferase発現プラスミドを用いて検討した。Hepa1c1c7細胞に活性化型Rasを遺伝子導入し、さらに細胞をMC処理すると、それぞれ単独処理と比べて高いLuciferase活性が検出された。このことはwestern blotにより検出されたCYP1A1タンパク質量によっても再現された。これらの結果から、AhR/ARNTによる転写調節機能はRasのシグナル系によって調節を受けることが示唆された。

1. Immune dyeing に よ る Ah receptor cells inside bureau in analytical I 々 の は Ah receptor bureau in を の cell suppression し て い る シ グ ナ ル go を decided す る た め, こ の match column を containing short む い ペ プ チ ド match column と GST - GFP と の fusion タ ン パ ク を with い て parsing を お こ な っ て き た. This year は cells に 発 now さ せ た span AhR の bureau in others type を parsing す る for, ihs タ グ を fusion し た AhR の cells inside bureau in を, 蛍 light antibody に よ る cell staining で adjustable べ た. Youdaoplaceholder0 ウスHepa1c1c7 cells でHis-AhRを transient に occurrence させた. コ ン ト ロ ー ル cells で に cytoplasm に innings in し た の に し seaborne, AhR リ ガ ン ド で あ る メ チ ル コ ラ ン ス レ ン (MC) 処 Richard す る と nuclear に bureau in し た. One party, the nuclear translocation agency を hinders するレプト するレプト シ シ で で handling によって <s:1> the nuclear authority is on が観 inspection された. こ れ ら よ り, span の AhR タ ン パ ク qualitative に つ い て も between nuclear ー cytoplasm を reciprocating し て い る こ と が shown さ れ た. 2. Intracellular シ グ ナ ル 伝 da system に よ る AhR の activity regulating AhR の は cell に inner す る リ ガ ン ド に よ っ て adjust さ れ て い る と exam え ら れ る が, ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン by volume in the capacity of body や he の nuclear body で 観 examine さ れ て い る よ う に, リ ン acidification な ど を interface し た シ グ ナ ル 伝 da 経 road に よ っ て も suppression さ れ て Youdaoplaceholder0 possibility がある. そ こ で, intracellular シ グ ナ ル 伝 に important cut を な service も つ Ras タ ン パ ク qualitative の AhR activity へ の influence を, AhR/ARNT が know す る XRE match column お よ び CYP1A1 の 5 'upstream areas を link し た Luciferase 発 now プ ラ ス ミ ド を with い て beg し 検 た. Type に Hepa1c1c7 cells activeness Ras を heritage 伝 import し, さ ら に cells を MC 処 Richard す る と, そ れ ぞ れ 単 処 reason alone と than べ て high い Luciferase activity が 検 out さ れ た. <s:1> <s:1> と によ western blotによ <s:1> 検 results in されたCYP1A1タ パ パ <s:1> <s:1> quality によって と reproduction された. こ れ ら の results か ら, AhR/ARNT に よ る planning write adjust enginery は Ras の シ グ ナ ル department に よ っ て adjust を by け る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Togo Ikuta: "Nucleocytoplasmic Shuttling of Arylhydrocarbon receptor"Journal of Biochemistry. 127. 503-509 (2000)

Togo Ikuta：“芳基烃受体的核细胞质穿梭”生物化学杂志。

生田統悟: "Ah レセプター"遺伝子医学. 3(2). 144-148 (1999)

Togo Ikuta：“Ah受体”遗传医学。144-148（1999）。

生田統悟: "ダイオキシン レセプターの細胞質-核間輸送"実験医学. 17(18). 78-84 (1999)

Togo Ikuta：“二恶英受体的细胞质核转运”实验医学 17(18) (1999)。