発生期におけるAhリセプターの生理機能に関する研究

Ah受体在发育过程中的生理功能研究

• 批准号: 08770023
• 负责人: 生田 統悟
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770023/
• 关键词: Ahレセプター; ダイオキシン; 核移行シグナル

arylhydrovarbon receptor(AHR)はリガンド依存性に細胞質から核へ移行して転写因子として機能する物質であり,ダイオキシン等環境中の変異原物質による様々な生体反応を仲介している。特に胎生期では薬剤による催奇性に関与している可能性があり,AHRは発生期における形態形成に何らかの役割をもつことが考えられる。AHRの生物作用は未知な点が多いが,発生期における発現部位の決定やその活性化に重要である生体内リガンドの決定は興味深い研究課題である。本研究はマウス胎児を用いて,AHRの発現部位を解析すること,またAHRの生物作用を調べるための基礎として,その核移行シグナル(NLS)を決定することを目的とし,以下の結果を得た。1.発生期におけるAHR発現部位の解析C57blackマウスの胎生18,19日齢および新生仔の脳,肺,心臓,肝臓,脾臓,腎臓,皮膚よりRNAを抽出し,RT-PCR法によりAHRのRNAレベルでの検出を行ったところ,調べた全ての組織でAHR発現が認められた。本法は組織間での発現量を比較することは困難なため,さらにpolyA RNAを用いてNorthern法による検出を試みたが,発現量は検出限界以下であった。現在,免疫組織染色により発現部位を調べるため,抗AHR抗体を作成中である。2.AHRのNLSの決定β-galactosidaseとAHRの融合蛋白質を発現ベクターを用いてHela細胞で発現させ,その細胞内局在を検出したところ,少なくともAHRのN端側120アミノ酸が核移行に必要であることがわかった。さらにGST-AHR-GFP融合蛋白質を大腸菌で発現させ,Hela細胞に微量注入して,詳細な検討を行ったところ,18アミノ酸を挟む2つの塩基性アミノ酸領域から構成される13-39アミノ酸がNLSとして機能することが示された。

Arylhydrovarbon receptor (AHR) は リ ガ ン ド dependency に cytoplasm か ら nuclear へ transitional し て planning write factor と し て function す る material で あ り, ダ イ オ キ シ ン environment such as の - different original material に よ る others 々 な raw body against 応 を placement し て い る. Special に TaiShengQi で は 薬 tonic に よ る push singularity に masato and し て い る possibility が あ り, AHR は 発 stage に お け る morphogenetic に what ら か cut を の service も つ こ と が exam え ら れ る. AHR の unknown biological role は な が more い が, 発 stage に お け る 発 の decided now parts や そ の activeness に important で あ る born in vivo リ ガ ン ド の decided は tumblers deep い research topic で あ る. This study は マ ウ ス tire where を with い て, AHR の 発 now parts を parsing す る こ と, ま た AHR を の biological function callback べ る た め の based と し て, そ の nuclear migration シ グ ナ ル (NLS) を decided す る こ と を purpose と し, the result of the following の を た. 1. 発 stage に お け る AHR 発 now parts の parsing C57black マ ウ ス の viviparous 18th and 19th day 齢 お よ び newborn larvae の 脳, lungs, heart is crucial, crucial liver, splenic, renal viscera, skin よ り to extract RNA を し, rt-pcr method に よ り AHR の RNA レ ベ ル で の 検 を row っ た と こ ろ, adjustable べ た full て の organization で AHR 発 Now が recognizes められた. This law は organizations で の 発 quantity を now compare す る こ と は difficult な た め, さ ら に polyA RNA を with い て Northern method に よ る 検 try out を み た が, 発 now quantity は 検 out limits the following で あ っ た. Now, the immunotissue staining によ を occurrence site を is adjusted べるため, and the anti-AHr antibody を is being produced である. 2. The AHR の NLS の decided to beta - galactosidase と AHR の fusion protein を 発 now ベ ク タ ー を with い て Hela で 発 now さ せ, そ の cells inside bureau in を 検 out し た と こ ろ, less な く と も AHR の N end side 120 ア ミ ノ acid が nuclear migration に necessary で あ る こ と が わ か っ た. さ ら に GST - AHR - GFP fusion protein を coliform で 発 now さ せ, Hela に trace injection し て, detailed な 検 line for を っ た と こ ろ, 18 ア ミ ノ acid を carry む 2 つ の salt basic ア ミ ノ acid field か ら constitute さ れ る 13-39 ア ミ ノ acid が NLS と し て function す る こ と が shown さ れ た.