微生物酵素を用いる「低プリン食品」生産プロセスの開発と高尿酸血症の予防と治療

微生物酶“低嘌呤食品”生产工艺开发及高尿酸血症防治

• 批准号: 11760065
• 负责人: 小川 順
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760065/
• 关键词: プリン塩基; プリンヌクレオシド; ヌクレオシダーゼ; プリンヌクレオシダーゼ; 高尿酸血症; 尿酸; ヌクレオシド

高尿酸血症は尿酸が体内に過剰蓄積するために生じる疾病である。尿酸蓄積の原因の一つとして食餌由来のプリンヌクレオシドがあり、これを低減することが高尿酸血症の予防に有効である。本研究では食餌中のプリンヌクレオシドを特異的かつ安全に分解しうるプリンヌクレオシダーゼの開発、および、解析例の無い細菌由来プリンヌクレオシダーゼについて基礎的知見を得ることを目的とした。前年度では、代表的な食品加工条件の一つである、酸性高温下で活性なプリンヌクレオシダーゼを微生物に探索した結果、細菌Ochrobactrum anthropiに目的酵素を見いだした。本年度においては、O.anthropiのプリンヌクレオシダーゼの単離精製、諸性質の解明、ならびに、酵素遺伝子の解析を行った。本酵素は、分子量40,000のサブユニットからなるホモテトラマー酵素であり、プリンヌクレオシドに特異的に作用する一方、ピリミジンヌクレオシドにより非拮抗的に阻害を受けた。また、精製酵素のN末端アミノ酸配列を基に作成したオリゴヌクレオチドを用いたゲノミックサザンハイブリダイゼーションを行い、本酵素遺伝子全長を含む約1.5kbpの断片をクローニングした。本酵素遺伝子の推定アミノ酸配列は、22残基のリーダー配列を含む363残基のアミノ酸から成り、カルシウム結合領域、活性中心領域、塩基認識領域において原生動物由来のプリンヌクレオシダーゼと相同性を示した。

Hyperuricemia is caused by excessive accumulation of uric acid in the body. The causes of uric acid accumulation include: the origin of diet, the decrease of diet, and the prevention of hyperuricemia. This study aims to analyze the origin of bacteria in the diet, and to obtain the basic knowledge of food safety. In the previous year, the representative food processing conditions were investigated, and the activity of microorganisms under acidic and high temperature conditions was investigated. The target enzyme of bacteria Ochrobactrum anthropi was found in the middle of the investigation. This year, we have been engaged in the purification, characterization, enzyme analysis of O.anthropi. The enzyme has a specific effect on the enzyme with a molecular weight of 40,000, and is resistant to non-antagonistic effects. The N-terminal amino acid sequence of the purified enzyme was prepared by using the enzyme sequence as a template, and the enzyme sequence contained a fragment of about 1.5 kbp in length. The putative amino acid sequence of this enzyme gene is shown in the amino acid sequence of 22 residues, the amino acid sequence of 363 residues, the amino acid binding domain, the active center domain, and the amino acid recognition domain.

项目成果

J.Ogawa et al.: "β-Carbon stereospecificity of N-carbamoyl-D-α-amino acid amidohydrolase for α,β-diastereomeric amino acids"Appl.Microbiol.Biotechnol.. 52. 797-801 (1999)

J.小川等人：“N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸酰胺水解酶对α，β-非对映体氨基酸的β-碳立体特异性”Appl.Microbiol.Biotechnol..52.797-801(1999)

J.Ogawa et al: "Enzyniatic production of pyruvate from fumarate-an application of microbial oyclic-imide-traus forming pathway"J.Molec.Catal.B Enzymatic. 11. 355-359 (2001)

J.Okawa 等人：“从富马酸酶促生产丙酮酸 - 微生物环酰亚胺-traus 形成途径的应用”J.Molec.Catal.B 酶促。

J.Ogawa et al.: "Purification, Characterization, and Gene Cloning of Purine Nucleosidase from Ochrobactrum authrepi"Appl.Environ.Microbiol.. 67(4)(in press). (2001)

J.Okawa 等人：“来自 Ochrobactrum authrepi 的嘌呤核苷酶的纯化、表征和基因克隆”Appl.Environ.Microbiol.. 67(4)（印刷中）。

J.Ogawa et al.: "3-carbamoyl-d-picolinic acid production by imidase-catalyzed regioselective hydrolysis of 2,3-pyridinedicarboximide in a water-organic solvent, two phase system"Appl.Microbiol.Biotechnol.. 54. 331-334 (2000)

J.Okawa 等人：“通过酰亚胺酶催化的 2,3-吡啶二甲酰亚胺在水-有机溶剂、两相系统中的区域选择性水解生产 3-氨基甲酰基-d-吡啶甲酸”Appl.Microbiol.Biotechnol.. 54. 331

J.Ogawa et al: "Separative preparation of the four stereoisowers of β-methyl phenylalanine with N-carbamoyl amino actd amidohydrolases"J.Molec.Catal.B Enzymatic. 12. 71-75 (2001)

J.Okawa 等人：“用 N-氨基甲酰氨基作用的酰胺水解酶分离制备 β-甲基苯丙氨酸的四种立体异构体”J.Molec.Catal.B Enzymatic.12.71-75 (2001)