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選択的阻害剤を用いたスフィンゴ脂質の合成と細胞内転送過程の解析

使用选择性抑制剂分析鞘脂合成和细胞内转运过程

基本信息

批准号：
11760081
负责人：
室井誠
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

糖蛋白質細胞内転送阻害剤の探索系で活性の認められたPenicillium属F13459株の生産する活性物質の単離を行った。10Lの培養液から55mgの活性物質F13459物質を単離した。構造解析の結果、F13459物質はミコフェノール酸の誘導体である新規化合物3,4-dihydro-3,4,6,8-tetrahydroxy-3-methyl-1H-2-benzopyran-1-one 4-O-mycophenolateであった。F13459はNDV感染BHK細胞の細胞融合を3.2mg/ml以上の濃度で合胞体形成阻害した。赤血球凝集素の合成は25mg/mlで強く阻害されたが、6.25と3.2mg/mlの濃度では赤血球凝集素の合成は顕著に阻害されず、合胞体形成が阻害された。従って、この濃度では糖蛋白質の細胞内転送が阻害されることが示唆された。F13459の阻害がグアノシンを添加によって回復することや、エステル部分の加水分解後のサンプルでは、ミコフェノール酸の部分にのみ阻害活性が認められたことから、阻害活性はミコフェノール酸と同様なものであることが示唆された。C_6-NBD-ceramideを用いてBHK細胞のグルコシルセラミドとスフィンゴミエリンの合成と細胞内転送を解析した。糖蛋白質並びにスフィンゴミエリンの細胞内転送阻害剤であるBrefeldin A存在下では、C_6-NBD-グルコシルセラミドとC_6-NBD-スフィンゴミエリンの合成亢進が認められた。スフィンゴ脂質の合成の場であるゴルジ体の形態に作用する阻害剤ではモネンシンでも同様の作用が認められたが、オカダ酸ではスフィンゴミエリンのみが合成亢進していた。BFA存在下で認められる1.6-2.8倍のC_6-NBD-グルコシルセラミドの合成亢進は濃度非依存的であるのに対してC_6-NBD-スフィンゴミエリンの場合には濃度依存的であった。また、C_6-NBD-グルコシルセラミドの合成亢進はシクロヘキシミドやアクチノマイシンDで抑制されることから、転写の段階で制御されていることが示唆された。C_6-NBD-スフィンゴミエリンの場合は抑制が起こらなかったことから、これらの過程は別のメカニズムに起因すると考えられる。また、C_6-NBD-グルコシルセラミドとC_6-NBD-スフィンゴミエリンの細胞内転送はBFA非感受性であることが示唆された。

Identification of the activity of glycoprotein intracellular transport inhibitors and production of active substances by Penicillium strain F13459 55mg of active substance F13459 in 10L of culture medium As a result of structural analysis, F13459 is a new compound 3,4-dihydro-3,4,6,8-tetrahydroxy-3-methyl-1H-2-benzopyran-1-one 4-O-mycophenolate. F13459 inhibited syncytial formation in NDV infected BHK cells at concentrations above 3.2 mg/ml. Hemagglutinin synthesis was strongly inhibited at concentrations of 25mg/ml, 6.25 mg/ml and 3.2 mg/ml, and syncytial formation was inhibited at concentrations of 25 mg/ml and 3.2 mg/ml, respectively. The intracellular transport of glycoproteins is blocked by the concentration of glucose and protein. F13459's resistance to loss of activity after hydrolysis, resistance to loss of activity, resistance to loss of activity C_6-NBD-ceramide was used to analyze the synthesis and intracellular transport of BHK cells. In the presence of Brefeldin A, the intracellular transport inhibitor of glycoproteins and proteins is responsible for the synthesis of C_6-NBD-1, C_6-NBD-2, C_6-NBD-1, C_6-NBD-1, C_6- 2, C_6-NBD-1, C_6 - 2, C_6-NBD-1, C_6 - 1, C_6-NBD-1, C_6-NBD-1, C_6 - 1, C_6 The effect of lipid synthesis on the morphology of the body was studied. In the presence of BFA, the synthesis hyperactivity of C_6-NBD-1-C_6-NB_6 - 1-C_6-NB_6-NB_ C_6-NBD-C-C C_6-NBD-1 is the most important component of the system. C_6-NBD-1, C_6-NBD-2, C_6-NBD-3, C_6-NBD-4, C_6-NBD-4, C_6-NBD_6 - 4, C_6-NBD_6 - 4, C