一酸化窒素感受性塩素イオンチャネルの細胞防御機能と分子構造の相関

细胞防御功能与一氧化氮敏感氯离子通道分子结构的相关性

基本信息

批准号：
11770022
负责人：
酒井秀紀
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、胃酸分泌細胞の基底側膜に存在する細胞防御塩素イオンチャネル(Cl^-チャネル)の分子実体および調節機構を明らかにする目的で、電気生理学的、分子生物学的、生化学的研究を行い、以下のような興味深い新知見を得た。1.ウサギ胃酸分泌細胞における電気生理学的実験で、インターロイキン-1βが、胃酸分泌細胞基底側膜のIL-1受容体に結合し、細胞防御Cl^-チャネルを閉じることを発見した。この機構には、一酸化窒素と反応しその効果を消失させるスーパーオキシドアニオンの産生が介在しており、シトクロムP-450の関与が示唆された。2.精製したウサギ胃酸分泌細胞より調製したmRNAを用いて、各種Cl^-チャネルの遺伝子発現について検討した。ノーザンブロットにより、CLC-2、CLC-3、CLC-5mRNAの有意な発現が確認された。CFTR mRNAの発現は非常に弱く、CLCA1 mRNAは全く発現していなかった。CLC-2、CLC-3、CLC-5蛋白質に対する抗体を使用した生化学的実験で、CLC-2は細胞質画分に、CLC-3は細胞質および原形質膜画分に存在していた。胃粘膜の凍結切片を用いた免疫組織染色でCLC-5の分布が胃酸分泌細胞に特異的で、細胞質および原形質膜に存在していることがわかった。CLCチャネルが、一酸化窒素感受性Cl^-チャネルの分子実体である可能性について検討中である。3.ウサギ胃酸分泌細胞より調製したmRNAを、アフリカツメガエル卵母細胞にインジエクションし、一酸化窒素およびサイクリックGMP感受性の電流の出現について検討を行ったところ、Cl^-チャネル阻害剤のNPPBでブロックされるアニオン電流が観察された。

在这项研究中，我们进行了电生理，分子生物学和生化研究，以阐明胃酸分泌细胞基底膜中存在的细胞保护氯离子通道（CL^ - 通道）的分子实体和调节机制，并获得了以下有趣的新发现。 1。在兔胃酸分泌细胞中的电生理实验发现白细胞介素1β与胃酸分泌细胞的基底膜中的IL-1受体结合，并关闭受细胞保护的CL^ - 通道。该机制是由与一氧化氮反应并消除其作用的超氧化阴离子的产生介导的，表明细胞色素P-450的参与。 2。使用纯化的兔胃酸分泌细胞制备的mRNA检查了各种Cl^通道的基因表达。北印迹证实了CLC-2，CLC-3和CLC-5 mRNA的显着表达。 CFTR mRNA的表达非常弱，并且没有表达CLCA1 mRNA。在使用抗CLC-2，CLC-3和CLC-5蛋白抗体的生化实验中，细胞质和质膜膜级分中存在CLC-2。使用胃粘膜冷冻切除术的免疫组织学表明，CLC-5的分布是胃酸分泌细胞的特异性，并且存在于细胞质和质膜中。目前正在研究CLC通道是一氧化氮敏感Cl^通道的分子实体的可能性。 3。从兔胃酸分泌细胞制备的mRNA被注入爪蟾卵母细胞中，并研究了一氧化氮和环状GMP敏感电流的出现，并观察到Cl^ - 通道抑制剂NPPB阻断的阴离子电流。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Hideki Sakai: "A cytoprotective chloride channel in gastric parietal cell"Yakugaku Zasshi. 119・8. 584-596 (1999)

酒井秀树：“胃壁细胞中的细胞保护性氯离子通道”Yakugaku Zasshi 119・8（1999）。

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0
作者：
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Hideki Sakai: "Cloning and fuctional expression of a novel degenerin-like Na^+ channel gene in mammals"Journal of Physiolgy (London). 519・2. 323-333 (1999)

Hideki Sakai：“哺乳动物中新型退化蛋白样 Na^+ 通道基因的克隆和功能表达”《生理学杂志》（伦敦）519·2（1999）。

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0
作者：
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Suzuki,T.,Sakai,H.and Takeguchi,N.: "Thromboxane A_2-mediated Cl^- secretion induced by platelet-activating factor in isolated rat colon."European Journal of Pharmacology. 400・2-3. 297-303 (2000)

Suzuki, T.、Sakai, H. 和 Takeguchi, N.：“血小板活化因子在离体大鼠结肠中诱导血栓烷 A_2 介导的 Cl^- 分泌”。欧洲药理学杂志 400・2-3。 (2000)

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0
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Hideki Sakai: "Thromboxane A_2 receptor linked with the Ca^<2+> pathway in rat colonic crypt cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 258・3. 708-712 (1999)

Hideki Sakai：“大鼠结肠隐窝细胞中与 Ca^2+ 途径相关的血栓烷 A_2 受体”《生物化学和生物物理研究通讯》258·3（1999）。

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Sakai,H.,Ukai,M.,Ikari,A.,Asano,S.and Takeguchi,N.: "Is rabbit CLCA1 related to the basolateral Ca^<2+>-dependent Cl^- channel of gastric parietal cells?"Japanese Journal of Physiology. (印刷中). (2001)

Sakai, H.、Ukai, M.、Ikari, A.、Asano, S. 和 Takeguchi, N.：“兔 CLCA1 与胃壁细胞基底外侧 Ca^2+ 依赖性 Cl^- 通道相关吗？ “日本生理学杂志。（印刷中）。（2001）

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通讯作者：
山内理嗣