3種類の胃プロトンポンプトランスポートソームの機能と環境基盤の解明

阐明三种胃质子泵转运体的功能和环境基础

• 批准号: 20056010
• 负责人: 酒井 秀紀
• 金额: $ 4.61万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056010/
• 关键词: 胃酸分泌細胞; アピカル膜; 界面活性剤; コレステロール; 脂質ラフト; カベオラ; プロトンポンプ; トランスポートソーム; 細管小胞; カベオソーム

本研究では、胃酸分泌細胞アピカル膜(分泌膜)の胃プロトンポンプ(H^+,K^+-ATPase)の調節機構における、脂質環境とK^+-Cl^-共輸送体(KCC4)の役割について検討した。ブタ胃粘膜からアピカル膜に富むベシクル(SAV)を調製し、SAVを界面活性剤のCHAPSで処理することにより、脂質ラフトに対応するdetergent-resistant membranes(DRM)画分と、非ラフトに対応するnon-DRM画分を単離した。SAVの胃プロトンポンプ活性はmethyl-β-cyclodextrin (MβCD)処理による脂質ラフトの破壊で顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加によるラフトの再構築で元のレベルにまで回復した。SAVにおいて、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方の画分に分布している一方、H^+,K^+-ATPaseと分子会合しCl^-輸送に関与しているKCC4は、DRMにのみ分布していた。MβCD処理後、H^+,K^+-ATPaseはDRMにおいて観察されなくなり、non-DRMにのみ分布した。一方、KCC4の分布はMβCD処理により影響を受けなかった。H^+,K^+-ATPaseとKCC4を安定共発現させたHEK293細胞においても、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方に分布する一方、KCC4はDRMのみに分布した。またMβCD処理後の分布パターンもSAVの場合と同様であった。H^+,K^+-ATPase-KCC4共発現細胞のH^+,K^+-ATPase由来プロトン輸送活性は、MβCD処理により顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加にょり回復した。以上のことから、アピカル膜の脂質ラフトに存在する胃プロトンポンプは、異なるラフトに存在するKCC4と連関し、アップレギュレーションされているものと考えられた。

This study investigated the regulatory mechanism of the gastric acid secretion membrane (secretory membrane) and the lipid environment and the activation of K^+-Cl^-cotransporter (KCC4). The membranes of gastric mucosa is rich in SAV, SAV and CHAPS. The membranes of gastric mucosa is rich in SAV. The membranes of gastric mucosa is rich in SAV. The activity of SAV in the stomach was reduced by methyl-β-cyclodextrin (MβCD) treatment, and the activity of SAV in the stomach was restored by addition of water-soluble cyclodextrin. SAV, H^+,K^+-ATPase, DRM, non-DRM, and non-DRM are distributed in one direction, H^+,K^+-ATPase, molecular rendezvous, Cl^-transport, and KCC4, DRM, and non-DRM are distributed in the other direction. After MβCD treatment, H^+,K^+-ATPase was observed in DRM and non-DRM. One side, KCC4 distribution is affected by MβCD treatment. H^+,K^+-ATPase and KCC4 are stably co-expressed in HEK293 cells. H^+,K^+-ATPase and DRM are distributed in the opposite direction. KCC4 is distributed in the opposite direction. The distribution of MβCD after treatment is the same as that of SAV. H^+,K ^+-ATPase transport activity in H^+,K^+-ATPase-KCC4 co-developing cells decreased due to MβCD treatment and recovered due to the addition of water-soluble ATPase. The lipid content of the membrane is present in the KCC4, but the lipid content of the membrane is present in the KCC4.

项目成果

Aquaporin-5-mediated cancer cell differentiation in human gastric adenocarcinoma

水通道蛋白 5 介导的人胃腺癌癌细胞分化

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀
• 通讯作者: 酒井秀紀

Gastric proton pump activity is regulated by K^+-Cl^- cotransporter-4 in the apical canalicular membrane of parietal cells

胃质子泵活性由壁细胞顶小管膜中的 K^-Cl^- 协同转运蛋白-4 调节

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人
• 通讯作者: 藤井拓人

Functional Association between K+-Cl- Cotransporter-4 and H+,K+-ATPase in the Apical Canalicular Membrane of Gastric Parietal Cells

• DOI: 10.1074/jbc.m806562200
• 发表时间: 2009-01-02
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Fujii, Takuto;Takahashi, Yuji;Sakai, Hideki
• 通讯作者: Sakai, Hideki

胃壁細胞アピカル膜の酸分泌機構の分子生理

胃壁细胞顶膜泌酸机制的分子生理学

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人
• 通讯作者: 藤井拓人

酸分泌休止時と刺激時における胃プロトンポンプの性質

休息和刺激酸分泌时胃质子泵的特性

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人;富沢真也;藤田恭輔
• 通讯作者: 藤田恭輔