3種類の胃プロトンポンプトランスポートソームの機能と環境基盤の解明

阐明三种胃质子泵转运体的功能和环境基础

• 批准号: 20056010
• 负责人: 酒井 秀紀
• 金额: $ 4.61万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056010/
• 关键词: 胃酸分泌細胞; アピカル膜; 界面活性剤; コレステロール; 脂質ラフト; カベオラ; プロトンポンプ; トランスポートソーム; 細管小胞; カベオソーム

本研究では、胃酸分泌細胞アピカル膜(分泌膜)の胃プロトンポンプ(H^+,K^+-ATPase)の調節機構における、脂質環境とK^+-Cl^-共輸送体(KCC4)の役割について検討した。ブタ胃粘膜からアピカル膜に富むベシクル(SAV)を調製し、SAVを界面活性剤のCHAPSで処理することにより、脂質ラフトに対応するdetergent-resistant membranes(DRM)画分と、非ラフトに対応するnon-DRM画分を単離した。SAVの胃プロトンポンプ活性はmethyl-β-cyclodextrin (MβCD)処理による脂質ラフトの破壊で顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加によるラフトの再構築で元のレベルにまで回復した。SAVにおいて、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方の画分に分布している一方、H^+,K^+-ATPaseと分子会合しCl^-輸送に関与しているKCC4は、DRMにのみ分布していた。MβCD処理後、H^+,K^+-ATPaseはDRMにおいて観察されなくなり、non-DRMにのみ分布した。一方、KCC4の分布はMβCD処理により影響を受けなかった。H^+,K^+-ATPaseとKCC4を安定共発現させたHEK293細胞においても、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方に分布する一方、KCC4はDRMのみに分布した。またMβCD処理後の分布パターンもSAVの場合と同様であった。H^+,K^+-ATPase-KCC4共発現細胞のH^+,K^+-ATPase由来プロトン輸送活性は、MβCD処理により顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加にょり回復した。以上のことから、アピカル膜の脂質ラフトに存在する胃プロトンポンプは、異なるラフトに存在するKCC4と連関し、アップレギュレーションされているものと考えられた。

This study で は, gastric acid secretion cell ア ピ カ ル membrane secretion (film) の stomach プ ロ ト ン ポ ン プ (^ ^ H +, K + ATPase) の regulator に お け る, lipid environment と K + Cl ^ - ^ a total conveying body (KCC4) cut に の service つ い て beg し 検 た. ブ タ gastric mucosa か ら ア ピ カ ル film に rich む ベ シ ク ル (SAV) を し modulation, SAV を interface active tonic の CHAPS で 処 Richard す る こ と に よ り, lipids ラ フ ト に 応 seaborne す る detergent - resistant membranes(DRM) are divided into と, non-ラ フトに against 応する, and non-DRM are divided into を単 away from た. SAV の stomach プ ロ ト ン ポ ン プ active は methyl - beta - cyclodextrin (M beta CD) 処 Richard に よ る lipid ラ フ ト の broken 壊 で 顕 に reduce し, water-soluble コ レ ス テ ロ ー ル の add に よ る ラ フ ト の to construct で yuan の レ ベ ル に ま で reply し た. SAV に お い て, H ^ + K ^ + - ATPase は DRM と non - DRM の struck party の draw points に distribution し て い る side, H ^ + K ^ + - ATPase と molecules meet し Cl ^ - conveying に masato and し て い る KCC4 は, DRM に の み distribution し て い た. M after the beta CD 処 and H ^ +, K ^ + - ATPase は DRM に お い て 観 examine さ れ な く な り, non - DRM に の み distribution し た. One side, the <s:1> distribution of KCC4 によ MβCD processing によ によ influence を is けな った った. ^ ^ H +, K + ATPase と KCC4 を stability were 発 now さ せ た HEK293 cells に お い て も, H ^ + K ^ + - ATPase は DRM と non - DRM の struck party に distribution す る side, KCC4 は DRM の み に distribution し た. After processing またMβCD, the <s:1> distribution is パタ and <s:1> と と SAV <s:1> situations are と the same as であった. ^ ^ H +, K + ATPase - KCC4 発 の H ^ + cells, total K ^ + - ATPase origin プ ロ ト ン は transport activity, M beta CD 処 に よ り 顕 に reduce し, water-soluble コ レ ス テ ロ ー ル の add に ょ り reply し た. Above の こ と か ら, ア ピ カ の ル membrane lipid ラ フ ト に exist す る stomach プ ロ ト ン ポ ン プ は, different な る ラ フ ト に exist す る KCC4 と even masato し, ア ッ プ レ ギ ュ レ ー シ ョ ン さ れ て い る も の と exam え ら れ た.

项目成果

Gastric proton pump activity is regulated by K^+-Cl^- cotransporter-4 in the apical canalicular membrane of parietal cells

胃质子泵活性由壁细胞顶小管膜中的 K^-Cl^- 协同转运蛋白-4 调节

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人
• 通讯作者: 藤井拓人

Aquaporin-5-mediated cancer cell differentiation in human gastric adenocarcinoma

水通道蛋白 5 介导的人胃腺癌癌细胞分化

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀
• 通讯作者: 酒井秀紀

Functional Association between K+-Cl- Cotransporter-4 and H+,K+-ATPase in the Apical Canalicular Membrane of Gastric Parietal Cells

• DOI: 10.1074/jbc.m806562200
• 发表时间: 2009-01-02
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Fujii, Takuto;Takahashi, Yuji;Sakai, Hideki
• 通讯作者: Sakai, Hideki

Function of KCC4 in the apical membrane of gastric parietal cells.

KCC4 在胃壁细胞顶膜中的功能。

• 发表时间: 2009
• 作者: Fujii;T.
• 通讯作者: T.

胃壁細胞アピカル膜の酸分泌機構の分子生理

胃壁细胞顶膜泌酸机制的分子生理学

• 发表时间: 2009
• 作者: A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人
• 通讯作者: 藤井拓人