3種類の胃プロトンポンプトランスポートソームの機能と環境基盤の解明

阐明三种胃质子泵转运体的功能和环境基础

基本信息

批准号：
20056010
负责人：
酒井秀紀
金额：
$ 4.61万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、胃酸分泌細胞アピカル膜(分泌膜)の胃プロトンポンプ(H^+,K^+-ATPase)の調節機構における、脂質環境とK^+-Cl^-共輸送体(KCC4)の役割について検討した。ブタ胃粘膜からアピカル膜に富むベシクル(SAV)を調製し、SAVを界面活性剤のCHAPSで処理することにより、脂質ラフトに対応するdetergent-resistant membranes(DRM)画分と、非ラフトに対応するnon-DRM画分を単離した。SAVの胃プロトンポンプ活性はmethyl-β-cyclodextrin (MβCD)処理による脂質ラフトの破壊で顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加によるラフトの再構築で元のレベルにまで回復した。SAVにおいて、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方の画分に分布している一方、H^+,K^+-ATPaseと分子会合しCl^-輸送に関与しているKCC4は、DRMにのみ分布していた。MβCD処理後、H^+,K^+-ATPaseはDRMにおいて観察されなくなり、non-DRMにのみ分布した。一方、KCC4の分布はMβCD処理により影響を受けなかった。H^+,K^+-ATPaseとKCC4を安定共発現させたHEK293細胞においても、H^+,K^+-ATPaseはDRMとnon-DRMの両方に分布する一方、KCC4はDRMのみに分布した。またMβCD処理後の分布パターンもSAVの場合と同様であった。H^+,K^+-ATPase-KCC4共発現細胞のH^+,K^+-ATPase由来プロトン輸送活性は、MβCD処理により顕著に減少し、水溶性コレステロールの添加にょり回復した。以上のことから、アピカル膜の脂質ラフトに存在する胃プロトンポンプは、異なるラフトに存在するKCC4と連関し、アップレギュレーションされているものと考えられた。

在这项研究中，我们研究了脂质环境和K^+-Cl^-Cotransporter（KCC4）在胃酸酸分泌细胞的顶膜（分泌膜）中胃质子泵（H^+，K^+ - ATPase）调节机理中的作用。从猪胃粘膜中制备了富含顶膜的囊泡（SAV），并通过用表面活性剂chaps处理SAV来分离与脂质筏相对应的非DRM级分。通过甲基-β-环糊精（MβCD）处理脂质筏的破坏，SAV的胃子泵活性显着降低，并通过添加水溶性胆固醇通过重建筏的重建来恢复其原始水平。在SAV中，H^+，K^+ - ATPase分布在DRM和非DRM级分中，而KCC4仅在DRM中分布与H^+，K^+ATPase分子相关，并参与Cl^-transport。 MβCD处理后，H^+，K^+ATPase不再在DRM中观察到，并且仅在非DRM中分布。另一方面，KCC4的分布不受MβCD处理的影响。在HEK293中，稳定地共表达H^+，K^+ - ATPase和KCC4，H^+，K^+ - ATPase分布在DRM和非DRM中，而KCC4仅在DRM中分布。此外，MβCD处理后的分布模式与SAV中的分布模式相同。 H^+，H^+，K^+ - ATPase-KCC4共表达细胞的H^+，K^+ - 源自ATPase衍生的质子转运活性显着降低，并通过添加水溶解的胆固醇来恢复。基于上述，人们认为，根尖膜中脂质筏中存在的胃质子泵与不同筏中存在的KCC4相关，并且被上调。

项目成果

期刊论文数量（35）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

イオンポンプ研究の最前線

离子泵研究前沿

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
薬学雑誌 130
影响因子：
0
作者：
森井孫俊;酒井秀紀
通讯作者：
酒井秀紀

胃壁細胞アピカル膜の酸分泌機構の分子生理

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DOI：
发表时间：
2009
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0
作者：
A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人
通讯作者：
藤井拓人

酸分泌休止時と刺激時における胃プロトンポンプの性質

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DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人;富沢真也;藤田恭輔
通讯作者：
藤田恭輔

Function of KCC4 in the apical membrane of gastric parietal cells.

KCC4 在胃壁细胞顶膜中的功能。

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujii;T.
通讯作者：
T.

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DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
A. Yoshikawa;et al.;Takashi Iida;酒井秀紀;飯田崇史;富沢直也;吉河朗;富沢真也;藤井拓人;吉河朗;初田真知子;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤井拓人;富沢真也;藤田恭輔;富沢真也;富沢真也;富沢真也;藤田恭輔;富沢真也;藤井拓人;藤田恭輔;岡崎真也;藤井拓人;酒井秀紀;酒井秀紀
通讯作者：
酒井秀紀

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Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司;藤井拓人;山内理嗣
通讯作者：
山内理嗣