大腸がん発症とトロンボキサンレセプター遺伝子発現異常の連関の分子生理学的研究

结直肠癌发生发展与血栓素受体基因表达异常关系的分子生理学研究

• 批准号: 12213049
• 负责人: 酒井 秀紀
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213049/
• 关键词: 大腸がん; 高分化腺癌; トロンボキサンA_2; トロンボキサンレセプター; トロンボキサン合成酵素; シクロオキシゲナーゼ; 遺伝子発現; 免疫組織染色

本研究では、大腸癌患者から摘出した腫瘍組織およびその近傍の正常組織の間でトロンボキサンA_2(TXA_2)レセプター、トロンボキサン合成酵素、シクロオキシゲナーゼ-2(COX-2)の発現量変化について検討した。腫瘍組織におけるTXA_2レセプタ-mRNAの発現は、正常組織に比べて高い症例もあったが、再現性が低く、全く変化の見られない症例もあった。しかし興味深いことに、トロンボキサン合成酵素mRNAは、大腸癌のうち高分化腺癌において、再現性の良い発現量増大が観察された。抗トロンボキサン合成酵素抗体を用いた免疫組織染色において、合成酵素タンパク質の発現量増大が、癌細胞自身に由来していることがわかった。COX-2mRNAの腫瘍組織における発現量増大の程度はトロンボキサン合成酵素の場合ほど顕著ではなかった。TXA_2レセプターおよびトロンボキサン合成酵素mRNAの発現は、各種ヒト大腸癌培養細胞(KM12-L4、T-84、HT-29、WiDr)において再現性良く観察された。一方、COX-2mRNA発現の再現性はトロンボキサン合成酵素の場合よりも乏しかった。大腸癌培養細胞のHT-29およびKM12-L4に対して、トロンボキサン合成酵素阻害剤を付加しても細胞の増殖能に変化はなかった。トロンボキサン合成酵素阻害剤あるいはトロンボキサンA_2安定アナログは、大腸癌培養細胞の遊走能を変化させなかった。以上の結果から、高分化腺癌の腫瘍組織で発現が増大するトロンボキサン合成酵素は、大腸癌と密接に関連しているものと考えられた。トロンボキサン合成酵素により産生されたTXA_2は、オートクライン因子として、癌細胞自身に作用するものではなく、近傍の血管内皮細胞などに影響を与えている可能性がある。他方、トロンボキサン合成酵素の発現自体が、大腸癌の発生・進展に関与している可能性も考えられる。

在这项研究中，我们研究了血栓烷A_2（TXA_2）受体，血栓烷合酶和环氧合酶-2（COX-2）的表达水平的变化，从结肠癌患者和周围正常组织中去除的肿瘤组织之间。尽管肿瘤组织中的TXA_2受体-MRNA表达高于正常组织中，但在某些情况下，可重复性较差且根本没有变化。然而，有趣的是，在结肠癌中，血栓烷合酶mRNA在分化良好的腺癌中的表达水平可再现。发现使用抗thromboxane合酶抗体免疫组织化学染色时，合成酶蛋白的表达增加是从癌细胞本身衍生而来的。肿瘤组织中COX-2 mRNA表达增加的程度不如血栓烷合酶中的明显。在各种人类结肠癌培养细胞（KM12-L4，T-84，HT-29，WIDR）中观察到TXA_2受体和血栓烷合酶mRNA的表达。另一方面，COX-2 mRNA表达的可重复性小于血栓烷合酶的可重复性。在培养的结肠癌细胞中，将血栓烷合酶抑制剂添加到HT-29和KM12-L4中不会改变细胞增殖能力。血栓烷合酶抑制剂或血栓烷A_2稳定类似物不会改变培养的结肠癌细胞的迁移潜力。基于上述结果，人们认为血栓烷合酶在分化良好的腺癌肿瘤组织中的表达增加与结肠癌密切相关。血栓烷合酶产生的TXA_2不适用于癌细胞本身作为自分泌因子，而是可能影响附近的血管内皮细胞等。另一方面，血栓烷合酶本身的表达也可能参与结肠癌的发育和发育。

项目成果

Suzuki,T.,Sakai,H.and Takeguchi,N.: "Thromboxane A_2-mediated Cl^- secretion induced by platelet-activating factor in isolated rat colon."European Journal of Pharmacology. 400・2-3. 297-303 (2000)

Suzuki, T.、Sakai, H. 和 Takeguchi, N.：“血小板活化因子在离体大鼠结肠中诱导血栓烷 A_2 介导的 Cl^- 分泌”。欧洲药理学杂志 400・2-3。 (2000)

Schaefer,L.,Sakai,H.,Mattei,M.-G.,Lazdunski,M.and Lingueglia,E.: "Molecular cloning, functional expression and chromosomal localization of an amiloride-sensitive Na^+ channel from human small intestine."FEBS Letters. 471・2-3. 205-210 (2000)

Schaefer, L.、Sakai, H.、Mattei, M.-G.、Lazdunski, M. 和 Lingueglia, E.：“人小肠阿米洛利敏感 Na^+ 通道的分子克隆、功能表达和染色体定位.《FEBS 快报》. 471・2-3. 205-210 (2000)

Sakai,H.: "Channel proteins associated with water permeation through cell membrane."Membrane. 25・2. 52-59 (2000)

Sakai，H.：“与水渗透细胞膜相关的通道蛋白”。膜 25・2。

Suzuki,T.,Sakai,H.,Ikari,A.and Takeguchi,N.: "Inhibition of thromboxane A_2-induced Cl^- secretion by antidiarrhea drug loperamide in isolated rat colon."Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 295・1. 233-238 (2000)

Suzuki, T.、Sakai, H.、Ikari, A. 和 Takeguchi, N.：“抗腹泻药物洛哌丁胺在离体大鼠结肠中抑制血栓素 A_2 诱导的 Cl^- 分泌。”药理学和实验治疗杂志 295。 1. 233-238 (2000)

Suzuki,T.,Sakai,H.,Ikari,A.and Takeguchi,N.: "Mobilization of intracellular Ca^<2+> by thromboxane A_2 does not affect Ca^<2+>-activated K^+ channels in rat colonic crypt cells."Japanese Journal of Physiology. 50・3. 389-393 (2000)

Suzuki, T.、Sakai, H.、Ikari, A. 和 Takeguchi, N.：“血栓素 A_2 动员细胞内 Ca^<2+> 不会影响大鼠体内 Ca^<2+> 激活的 K^+ 通道结肠隐窝细胞。”日本生理学杂志.50・3.389-393(2000)