レトロウイルス逆転写におけるtopoisomerase Iの作用機序の解析

拓扑异构酶I在逆转录病毒逆转录中的作用机制分析

• 批准号: 11770127
• 负责人: 高橋 秀宗
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770127/
• 关键词: レトロウイルス; RNAの安定性; topoisomerase I; HIV-1; 逆転写; ウイルスと宿主の相互作用; トポイソメラーセI

昨年度までの研究によりレトロウイルスの逆転写において宿主topoisomerase Iの特にライゲース活性が重要であることを見出した。さらに他の宿主因子の関与を調べるためにtopoisomerase IとN末端で結合する因子のうちC23及びPSFのHIV-1複製における関与を調べた。COS1細胞にinfectiousclone DNAとそれぞれの発現ベクターをコトランスフェクションしたところ、C23を発現させたときのみ、ウイルス蛋白の発現が上昇することが判明した。RNAの転写効率自体はC23発現に関わらず不変であったため、アクチノマイシンDによって転写を阻害しRNAの安定性をRT-PCRによって調べたところ、C23の発現によりゲノムRNAの安定性が増すことが判明した。また上精中のウイルス粒子もC23の発現により4倍程度上昇することが判明した。以上より、C23は何らかの機構によりゲノムRNAの安定性を増し、ウイルス粒子を経た感染細胞での逆転写に影響を及ぼしていることが示唆された。C23が粒子へ取り込まれていくか、ウイルス発芽へ影響を及ぼしているか、また粒子に取り込まれるtopoisomerase Iとの相互作用が必須であるか等さらに解析が必要であると考えられた。

The activity of host topoisome I is important in this study. In addition, the regulation of other host factors is related to the regulation of topoisomerase I and N-terminal binding factors such as C23 and PSF replication. COS1 cells infected with sclone DNA were found to have increased expression of C23 and C24 proteins. RNA stability was determined by RT-PCR in the presence of C23. RNA stability was determined by PCR in the presence of C23. The occurrence of C23 particles in the upper part of the body increased by a factor of four. The above, C23 and other mechanisms for the development of RNA stability increase, and its particles affect the reverse transcription of infected cells. C23-particle interaction is necessary for analysis.

项目成果

Takahashi R.H.,Takahashi H.et al.: "Analysis of HTLV-ll-like particle produced by recombinant baculovirus-infected insect cells"Virology. 256. 371-380 (1999)

Takahashi R.H.，Takahashi H.等人：“重组杆状病毒感染的昆虫细胞产生的HTLV-II样颗粒的分析”病毒学。

Takahashi,H.,Iwata,T.,Kitagawa,Y.,Shoya,Y.,Takahashi,RH.,Nagashima,K.,Kurata,T.: "Monoclonal antibodies against topoisomerase I suppressed DNA relaxation and HIV-1 cDNA synthesis."Hybridoma. 19. 331-334 (2000)

Takahashi,H.、Iwata,T.、Kitakawa,Y.、Shoya,Y.、Takahashi,RH.、Nagashima,K.、Kurata,T.：“针对拓扑异构酶 I 的单克隆抗体抑制 DNA 松弛和 HIV-1 cDNA 合成

Hasegawa,H.,Kadowaki,S.,Takahashi,H.,Iwasaki,T.,Tamura,S.,Kurata,T..:: "Protection against influenza virus infection by nasal vaccination in advance of sublethal irradiation"Vaccine. 18. 2560-2565 (2000)

长谷川，H.，门胁，S.，高桥，H.，岩崎，T.，田村，S.，仓田，T..：“在亚致死照射之前通过鼻疫苗接种预防流感病毒感染”疫苗。

Kenny K,Brechtel C,Takahashi H,Kurohara K,Anderson P,Gibbs CJ Jr.: "An enzyme-linked immunosorbent assay to quantify 14-3-3 proteins in the cerebrospinal fluid of suspected Creutzfeldt-Jakob disease patients."Ann Neurol.. 48. 395-398 (2000)

Kenny K、Brechtel C、Takahashi H、Kurohara K、Anderson P、Gibbs CJ Jr.：“一种酶联免疫吸附测定法，用于定量疑似克雅氏病患者脑脊液中的 14-3-3 蛋白。”Ann Neurol

Takahashi H.et al.: "Increased levels of εand γisoforms of 14-3-3 proteins in cerebrospinal fluid of patients with Creutzfeldt-Jakob disease"Clin.Diagn.Lab.Immunol.. 6. 933-985 (1999)

Takahashi H.等人：“克雅氏病患者脑脊液中 14-3-3 蛋白的 ε 和 γ 亚型水平升高”Clin.Diagn.Lab.Immunol.. 6. 933-985 (1999)