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HIV-1複製におけるトポイソメラーゼIのはたらき

拓扑异构酶 I 在 HIV-1 复制中的作用

基本信息

批准号：
07277227
负责人：
高橋秀宗
金额：
$ 1.92万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までの研究によってHIV-1ウイルスの製造蛋白であるgag蛋白がtopoisomerase Iを活性化することを明らかにした。本研究においてはこのgag蛋白による宿主topoisomerase Iの活性化がウイルス複製のどの段階でどの様に関わっているかを明らかとすることを目的とした。具体的にはウイルスとこの酵素の接点は逆転写にあると仮定し、逆転写の再構築系の確立後、gag蛋白によって活性化を受けるtopoisomerase I (topoI)の影響を調べるという、以下の方法を取った。1. HIV-1の部分的なゲノムをT7 polymeraseによって産生するプラスミドを構築、in vitroでRNAを転写する。2. 1.を用いたin vitro逆転写系を準備する。3. 2.のin vitro逆転写系において組み替えgag蛋白、topoisomerase I等のもたらす影響を調べる。その結果、両端にLTRを有し中央部gag-pol-envを除去した1本鎖HIV-1 RNAをテンプレートととし、C末端側のプライマー、市販精製RTを用いた逆転写反応において、GST-p15で活性化されたtopo Iを添加すると、加えたtopo Iの量に一致してcDNA生成量が増加した。一方、このcDNA合成量はtopo I阻外剤であるカンプトテシンによって濃度依存的に減少した。本研究ではこれまで、gag蛋白と宿主topoIの相互作用について明らかにしてきたが、この活性化されたtopo IのHIV-1における役割の解明が次に求められていた。そのため、HIV-1 RNAゲノムのin vitro複製モデル系を構築し、活性化topo Iの作用を検討した。その結果topo Iは逆転写効率をウイルスgag蛋白との関連により上昇させることが明らかになり、今後抗ウイルス剤の開発、モデル動物系の開発の礎となると考えられた。

This year's research has shown that HIV-1 protein production protein is activated by topoisomerase I. The aim of this study is to activate the host topoisomerase I in the gag protein, and to determine whether it is involved in the replication process. After the establishment of the reverse transcription and reconstruction system, the activation of gag protein is affected by topoisomerase I (topoI). The following methods are adopted. 1. Part of HIV-1 is produced by T7 polymerase, constructed in vitro and written in RNA. 2. 1. Use in vitro preparation 3. 2. In vitro reverse transcription system, the effects of protein, topoisomerase I, etc. As a result, there was a consistent increase in the amount of cDNA produced by removing gag-pol-env from the central part of the LTR and by adding GST-p15 to the C-terminal part of the LTR. The amount of cDNA synthesized in this study decreased in a concentration-dependent manner In this study, the interaction between gag protein and host topoI was investigated. HIV-1 RNA must be replicated in vitro to construct and activate the role of topo I. As a result, topo I reverse transcription efficiency increases in the correlation between protein and protein, and the development of future anti-protein and animal systems.