レトロウイルスの複製に関与する宿主因子の解析

逆转录病毒复制涉及的宿主因素分析

• 批准号: 09770162
• 负责人: 高橋 秀宗
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770162/
• 关键词: HIV-1の複製機構; 逆転写; ウイルスと宿主の相互作用; トポイソメラーゼ I; ウイルス複製の宿主因子; ATP結合因子; トポイソメラーゼ 1

精製したレトロウイルスに基質を加えると、非常に効率が悪く、ゲノムRNAをテンプレイトとしてDNAが産生される(ERTassay、endogenouse reverse transcription assay)。こ, の系へcDNA産生を上昇させることが判明している宿主因子topoisomerase Iとその機能的ミュータントを加えtopoisomerase Iと関連分子のHIV-1逆転写における役割を解析した。その結果、1,宿主因子であるTopoisomeraselを逆転写アッセイ系へ加えるとcDNAの作成を上昇させた。2,Topoisomeraselのミュータントを使い同様にアッセイした結果、酵素のヌクレアーゼ機能だけを失った変異体は依然として逆転写効率を上昇させたが、ライゲース活性を失った変異体は逆転写への影響を失っていた。3,上記の活性はATPによって特異的に上昇することが判明した。以上の結果を総合するとtopoisomeraselは逆転写においてRNAグノムに対しライゲースとしてはたらき、逆転写を活性化していることが示唆された。またこのライゲース活性はATPの結合によってさらに活性化される。よって結論として次のことが言える。1,逆転写がATP,topoisomeraselの宿主因子によって制御されていることから、宿主細胞または生態の病態によってウイルスの複製が大きく左右される可能性が示された。2,ライゲース活性が必須であることから、この活性が発揮されるとき、RNAゲノムの乗り換え等により、逆転写酵素自体による変異発生に加え、広い領域に渡る変異が生ずることが予想された。

Refined し た レ ト ロ ウ イ ル ス に matrix を plus え る と, very に sharper rate が 悪 く, ゲ ノ ム RNA を テ ン プ レ イ ト と し て DNA が produce さ れ る (ERTassay, endogenouse reverse transcription assay). こ, の へ cDNA generate を さ せ る こ と が.at し て い る host factors of topoisomerase I と そ の functionary ミ ュ ー タ ン ト を plus え topoisomerase I と masato inverse planning even molecular の HIV - 1 write に お け る service cut を parsing し た. そ の results, 1, host factors で あ る Topoisomerasel を inverse planning write ア ッ セ イ department へ plus え る と cDNA の made を rise さ せ た. 2, Topoisomerasel の ミ ュ ー タ ン ト を い with others に ア ッ セ イ し た results, enzyme の ヌ ク レ ア ー ゼ function だ け を lost っ た - variant は still と し て inverse planning working rate rising を さ せ た が, ラ イ ゲ ー ス active を lost っ た - variant は inverse planning write へ の influence を lost っ て い た. 3. The above record indicates a specific に increase in によって of <s:1> active <e:1> ATPによって, する とが とが, and the determination of た. の above results を 総 close す る と topoisomerasel は inverse planning write に お い て RNA グ ノ ム に し seaborne ラ イ ゲ ー ス と し て は た ら き を activeness, written by the inverse planning し て い る こ と が in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0 ラ ラ ゲ ゲ ス ス active また ATP <s:1> binding によってさらに activation される. Youdaoplaceholder0 conclusion と と て times とが とが とが words える. 1, inverse planning write が ATP, topoisomerasel の host factors に よ っ て suppression さ れ て い る こ と か ら, host cell ま た は ecological の pathological に よ っ て ウ イ ル ス の copy が big き く around さ れ が る possibility in さ れ た. 2, ラ イ ゲ ー ス active が must で あ る こ と か ら, こ の active が 発 swing さ れ る と き, RNA ゲ ノ ム の 乗 り replace え に よ り, inverse planning write enzymes of autologous に よ る - born different 発 に え, hiroo に い field crossing る - born different が ず る こ と が to think さ れ た.

项目成果

Takahashi,H.et al.: "AIDS dementia and HIV-1 replication." Neuropathololgy. 17. 4-10 (1997)

Takahashi,H.et al.：“艾滋病痴呆和 HIV-1 复制。”

Obara Y,Takahashi H,et al.: "Disutribution of HSV1 and 2 genomes in human spinal ganglia studied by PCR and in situ hybridisation." J.Med.Virology. 52. 236-142 (1997)

Obara Y、Takahashi H 等人：“通过 PCR 和原位杂交研究人类脊髓神经节中 HSV1 和 2 基因组的分布。”

Takahashi,H.et al.: "Characterization of antibodies raised against bovine-PrP-peptides." J.Neurovirol.(in press).

Takahashi,H.et al.：“牛 PrP 肽抗体的表征。”

Takahashi,R.H.,Takahashi,H.: "Analysis of HTLV-II-like particle produced by recombinant baculovirus infected insect cells." Virology. (in press).

Takahashi,R.H.,Takahashi,H.：“重组杆状病毒感染的昆虫细胞产生的 HTLV-II 样颗粒的分析。”

Chen,Z.,Takahashi,H.et al.: "Comparison of the ability of virai protein-expressing plasmid DNAs to protect against influenza." Vaccine. 16. 1544-1549 (1998)

Chen,Z.,Takahashi,H.等人：“表达病毒蛋白的质粒 DNA 预防流感的能力比较。”