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サル細胞によるHIV-1初期複製機構の解析

HIV-1在猴细胞中的早期复制机制分析

基本信息

批准号：
12035229
负责人：
高橋秀宗
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035229/
关键词：
HIV-1 C23 RNAの安定性逆転写 topoisomerase I

项目摘要

サルVero細胞へヒトCD4及びCCR5を発現させることにより、HIV-1の複製を調べることが可能になった。その結果、サル由来のHIV-1はヒト由来のHIV-1に比べ極端にVero細胞での複製が低下することが判明した。昨年度までの研究によりHIV-1の逆転写においてウイルスに取り込まれる宿主topoisomerase Iの特にライゲース活性が重要であることを見出しているが、上記のように、粒子中の宿主因子が複製に重要な働きを行っているため、さらに他の宿主因子の関与を調べた。Topoisomerase IとN末端で結合する因子のうちC23及びPSFのHIV-1複製における関与を調べた。COS1細胞にinfectious clone DNAとそれぞれの発現ベクターをコトランスフェクションしたところ、C23を発現させたときのみ、ウイルス蛋白の発現が上昇することが判明した。RNAの転写効率自体は不変であったため、アクチノマイシンDによって転写を阻害しRT-PCRによってRNAの安定性を調べたところ、C23の発現によりゲノムRNAの安定性が増すことが判明した。また上精中のウイルス粒子もC23の発現により4倍程度上昇することが判明した。以上より、C23は何らかの機構によりゲノムRNAの安定性を増し、ウイルス粒子を経た感染細胞での逆転写に影響を及ぼしていることが示唆された。C23が粒子へ取り込まれていくか、ウイルスの発芽へ影響を及ぼしているか、また粒子に取り込まれるtopoisomerase Iと共同してRNAに働きかけているか等さらに研究が必要であると考えられた。

Vero cell line CD4 and CCR5 may be involved in the development and replication of HIV-1. As a result, the origin of HIV-1 and the origin of HIV-1 are lower than those of Vero cells. Last year's research showed that HIV-1 reverse transcription was important for the selection of host topoisome I specific enzyme activity, and that host factors in particles were important for replication and regulation. Topoisomerase I and N-terminal binding factors C23 and PSF are involved in HIV-1 replication. COS1 cells were found to have infectious clone DNA and C23 protein expression increased. RNA stability is regulated by RT-PCR and C23 expression is increased. The occurrence of C23 particles in the upper part of the body increased by a factor of four. The above, C23 and other mechanisms for the development of RNA stability increase, and its particles affect the reverse transcription of infected cells. C23 particle selection is necessary for research on topoimerase I and RNA.