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ホルムアルデヒドによるホルムアルデヒド酸化酵素系誘導機構の解析

甲醛诱导甲醛氧化酶系统机制分析

基本信息

批准号：
11771439
负责人：
伊藤潔
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のfalAによってコードされているグルタチオン依存型ホルムアルデヒド脱水素酵素(FDH)の転写レベルの調節機構を解析し、FalRタンパク質が自身を含めたオペロンのプロモーター部位と結合するレプレッサーとして働き、ホルムアルデヒド存在下ではその抑制が解除されることを明らかにした。DNAのシス領域としてTATAの繰り返し配列が重要そうであることもわかってきた。FalRタンパク質とDNAとの結合がホルムアルデヒドによって阻害されることを直接照明すること、及びFalRの立体構造解明が残された重要課題である。そのため、FalRタンパク質精製の目的でHis-tagを付加した発現プラスミドを構築した。興味深いことに、このプラスミドではプロモーター配列が全く同じであるにも関わらず、ホルムアルデヒド非存在下の発現抑制が消失していることを見出した。種々の変異遺伝子の解析から、falR構造遺伝子の上流の5'-非翻訳領域(約20bp)が重要であることを明らかにした。しかしながら、そのメカニズムについてはさらに解析中である。酵母のシステムにおいて誘導発現に関わる遺伝子を同定することはまだできていないが、FDH遺伝子はPCRによって増幅、クローン化したので、今後誘導に関わる遺伝子を同定しなければならない。一方、Pseudomonas putida由来のグルタチオン非依存型ホルムアルデヒド脱水素酵素(現在は2分子のアルデヒドからカルボン酸とアルコールを生成させるdismutaseであることが判明している)に関してはホルムアルデヒドによる誘導は見られず、構成的に発現していた。この酵素については、酵素の結晶化に成功したので、X線により結晶構造を解析中である。

Analysis of the regulatory mechanism of the falA dependent enzyme (FDH) in E. coli, including the FalR protein itself, and the inhibition of the enzyme in the presence of the FalR protein. The DNA of a person is not the same as the DNA of a person. The combination of Falcon and DNA is an important topic for direct illumination and understanding of Falcon's three-dimensional structure. For the purpose of quality refinement, His-tag is added to the construction of the system. In the absence of such an arrangement, the occurrence and suppression of the phenomenon disappear. The 5'-non-inverted domain (about 20bp) of the upper stream of the falR structural heritage is important for the analysis of the genetic diversity of the species. In the middle of the analysis, there is a problem. Yeast gene expression is related to gene expression, and FDH gene PCR is related to amplification, gene expression and gene expression in the future. One side, Pseudomonas putida origin of the group of independent type of homolog dehydrin enzyme (now two molecules of homolog acid and homolog production of the dismutase) related to the formation of homolog induction of homolog, formation of the discovery. The enzyme is in the process of crystallization, and the X-ray crystal structure is analyzed.