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ホルムアルデヒド脱水素酵素の構造と反応機構の解明

阐明甲醛脱氢酶的结构和反应机制

基本信息

批准号：
07772174
负责人：
伊藤潔
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

P.putida FDH(PFDH)に存在すると考えた活性に重要なシステイン残基を同定することはできなかったが、ブチルアルデヒドを基質としたときのPFDHの反応生成物を詳しく定量的に調べた結果、dismutation反応を触媒していることが判明した。この反応において、補酵素であるNAD^+の量の変化は見かけ上観察されず、2分子のアルデヒドからアルコールとカルボン酸が生成する。PFDHはアミノ酸配列においてグルタチオン依存型FDHであるクラスIIIADHよりもクラスI型の特徴を多くもつことから、PFDHはdismutation反応を触媒するクラスI型ADHの特殊な例で、PFDHの反応は単なるホルムアルデヒドの酸化ではなくもっと複雑な反応で、アルデヒドの酸化反応に直接システイン残基が関与していないかも知れない。今後、ホルムアルデヒドを基質として反応生成物を詳しく定量的に調べて行くことが必要であると考えている。一方、大腸菌のFDH(EFDH)遺伝子(falA)をクローニングし、その塩基配列を決定したところ、falAの上流に273bpからなるORF1と非常によく保存されたプロモーターモチーフ、さらに、そのプロモーターと重なってパリンドローム構造があること、また、下流には831bpのORF2が存在することを見い出した。ORF2はヒトのホルミルグルタチオンヒドロラーゼ(SFGH)と40%のホモロジーを示し、実際ORF2を大腸菌中で過剰発現させ、SFGHの活性を測定したところ、ORF2が大腸菌のSFGHをコードしていることがわかった(falBと命名)。過剰発現させた酵素を単一に精製することにも成功した。これらの遺伝子はオペロンを形成しており、培地中にホルムアルデヒドを加えると速やかに活性が誘導されてくることも見い出した。さらに、この誘導調節にはORF1の発現と保存されたプロモーターモチーフおよびパリンドローム構造が重要であることを明らかにしつつある。

P.putida FDH (PFDH) is characterized by the presence of antioxidants, the activity of antioxidants, the presence of residues, the presence of antigens, the presence of PFDH, the quantification of the products, the quantification of the results, and the characterization of the catalyst, the results of dismutation. In the reverse phase, the enzyme was added to NAD^ +, and the molecular weight of the enzyme was detected. PFDH, dismutation, catalyst, catalyst, type I ADH, PFDH, acid, acid, Direct acidizing and anti-acidizing. In the future, you will need to know that the quantity of the product is higher than that of the product. On the one hand, the FDH (EFDH) sub-unit (falA), the falA-based configuration, the upstream 273bp, the ORF1, the upper stream, the lower stream, the lower stream, the upper stream, and the upstream of the falA, the upper stream of the 273bp, the ORF1, the ORF1, the other side. The ORF2 was not detected. The SFGH activity test was used to determine the activity of the bacteria. The falB was named under the name of the falB. It was found that the enzyme was successful in the first step. In the middle of the culture, you can increase the speed and speed up the speed and activity of the system. Please tell me that the ORF1 will now be saved. Please tell me that you need to know how to make important information.