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カテニンによる細胞接着分子カドヘリンの活性化機構

连环蛋白激活细胞粘附分子钙粘蛋白的机制

基本信息

批准号：
11780531
负责人：
永渕昭良
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University (2000)Kyoto University (1999)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780531/
关键词：
カドヘリン細胞間接着 βカテニン F9細胞ターゲティング Cre-loxP ノックイン αカテニン p120 F9

项目摘要

本研究はカドヘリン接着の活性化機構に焦点を絞り解析を進めている。本年度はこれまで余り解析されていない細胞間接着におけるβカテニンの役割を解明するためのに、βカテニン欠損F9細胞の単離を試みた。その結果、1.βカテニン遺伝子は遺伝子補足型ターゲッティングベクターの利用により高効率にF9細胞で破壊されうることが分かった。実際には薬剤耐性コロニーの内1/10以上が相同組み換えを起こしていた。2.βカテニン遺伝子を1つ破壊した時点でのサザン解析によりβカテニン遺伝子はF9細胞では3n状態になっており、完全なβカテニン欠損細胞を得るには3回の相同組み換えが必要であることが分かった。3.βカテニンは多様な機能を持つことが知られており、この遺伝子の完全欠損はF9細胞に致死性をもたらす可能性も考えられるため、ノックイン型のターゲティングベクターの作成を行った。このベクターではβカテニン遺伝子を破壊すると同時に外来性のタグ付きβカテニンを発現させるように構築されているため遺伝子が破壊されてもβカテニン蛋白質の発現は無くならない。さらにタグ付きβカテニンcDNAはloxP配列で挟まれているため、Creの導入によりタグ付きβカテニンの発現を除くことが可能である。このように本年度はβカテニン遺伝子が3nになっているためβカテニン欠損細胞を単離することは出来なかったがそれに必要なターゲティングベクターの構築および二つのアリルの破壊には成功した。今後βカテニン欠損細胞を作成しその機能解析を進めることにより、細胞間接着におけるβカテニンの機能解析を進めることが可能になる。

The purpose of this study is to improve the analysis of the focus of the active organization. In the current year, the balance of environmental pollution is analyzed, and then the β-cell isolation test is carried out to clarify the failure of F9 cell isolation test. The results were as follows: 1. The results showed that 1. The results were as follows: (1) the results were as follows: (1) the results of the results were as follows: 1. The results were as follows: 1. The results were as follows: (1) the results were as follows: (1) the results of the results, 1. 1. The results of the results are as follows: 1. The results are as follows: (1) the results of the results are as follows: (1) the results of the results are as follows: 1. The results of the results are as follows: 1. In the international market, there is a high level of tolerance in the same group of people with a tolerance of more than 1, 10 and above. 2. The cell of F9 in the cell of F9 is in a state of failure, while the cell of F9 is in a state of failure. 2. In the first half of the day, the failure of the cell in the first half of the day was analyzed in the first place, and the F9 cell in F9 was in the status of 3n. 3. The β-ray multiplex machine is capable of knowing that there is a complete lack of knowledge that the F9 cell is lethal, and that the possibility of the death of the F9 cell has been tested. At the same time, there is no significant difference between the two groups. At the same time, there is no significant difference between the two groups. Please tell me that you have to pay β and cDNA loxP to get rid of the possibility that you will not be able to do so. You will have to pay for β and Cre. This year, we need to know that it is necessary to tell us that it is necessary to break the problem of success in the current year. In the future, the β-cell will be able to analyze the difference between the cell and the cell, and then the β-cell will be able to analyze the possibility of the change.