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カテニンによる細胞接着分子カドヘリンの活性化機構

カテニンによる細胞接着分子カドヘリンの活性化機構
连环蛋白激活细胞粘附分子钙粘蛋白的机制
批准号：
11780531
负责人：
永渕 昭良
金额：
$1.41万
依托单位：
Kumamoto University (2000)Kyoto University (1999)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 2000
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780531/
关键词：
カドヘリン細胞間接着βカテニンF9細胞ターゲティングCre-loxPノックインαカテニンp120F9

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项目成果

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本研究はカドヘリン接着の活性化機構に焦点を絞り解析を進めている。本年度はこれまで余り解析されていない細胞間接着におけるβカテニンの役割を解明するためのに、βカテニン欠損F9細胞の単離を試みた。その結果、1.βカテニン遺伝子は遺伝子補足型ターゲッティングベクターの利用により高効率にF9細胞で破壊されうることが分かった。実際には薬剤耐性コロニーの内1/10以上が相同組み換えを起こしていた。2.βカテニン遺伝子を1つ破壊した時点でのサザン解析によりβカテニン遺伝子はF9細胞では3n状態になっており、完全なβカテニン欠損細胞を得るには3回の相同組み換えが必要であることが分かった。3.βカテニンは多様な機能を持つことが知られており、この遺伝子の完全欠損はF9細胞に致死性をもたらす可能性も考えられるため、ノックイン型のターゲティングベクターの作成を行った。このベクターではβカテニン遺伝子を破壊すると同時に外来性のタグ付きβカテニンを発現させるように構築されているため遺伝子が破壊されてもβカテニン蛋白質の発現は無くならない。さらにタグ付きβカテニンcDNAはloxP配列で挟まれているため、Creの導入によりタグ付きβカテニンの発現を除くことが可能である。このように本年度はβカテニン遺伝子が3nになっているためβカテニン欠損細胞を単離することは出来なかったがそれに必要なターゲティングベクターの構築および二つのアリルの破壊には成功した。今後βカテニン欠損細胞を作成しその機能解析を進めることにより、細胞間接着におけるβカテニンの機能解析を進めることが可能になる。
期刊论文(9)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kubota,K.,Furuse,M.,Sasaki,H.,Sonoda,N.,Fujita,K.,Nagafuchi,A.,and Tsukita,Sh.: "Ca^<++>-independent cell adhesion activity of claudins, a family of integral membrane proteins localized at tight junctions"Curr Biol.. 9. 1035-1038 (1999)
Kubota,K.、Furuse,M.、Sasaki,H.、Sonoda,N.、Fujita,K.、Nagafuchi,A. 和 Tsukita,Sh.：“Ca^< > 独立的 Claudins 细胞粘附活性，一种
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Imamura,Y.,Itoh,M.,Maeno,Y.,Tsukita,Sh.and Nagafuchi,A.: "Functional domains of alpha catenin required for the strong-state of cadherin-based cell adhesion"J.Cell.Biol.. 144. 1311-1322 (1999)
Imamura,Y.、Itoh,M.、Maeno,Y.、Tsukita,Sh. 和 Nagafuchi,A.：“基于钙粘蛋白的细胞粘附强状态所需的 α ​​连环蛋白的功能域”J.Cell.Biol。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Miyagishi,M.,Fujii,R.,Hatta,M.,Yoshida,E.,Araya,N.,Nagafuchi,A.,Ishihara,S.,Nakajima,T.,and Fukamizu,A: "Regulation of Lef-mediated transcription and p53-dependent pathway by associating beta-catenin with CBP/p300"J.Biol Chem,. 275. 35170-35175 (2000)
Miyagishi，M.，Fujii，R.，Hatta，M.，Yoshida，E.，Araya，N.，Nagafuchi，A.，Ishihara，S.，Nakajima，T.，和 Fukamizu，A：“Lef-的规定
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Takeda,H.,Shimoyama,Y.,Nagafuchi,A.and Hirohashi,S.: "E-cadherin functions as a cis-dimer at the cell-cell adhesive interface in vivo"Nat.Struct.Biol.. 6. 310-312 (1999)
Takeda, H.、Shimoyama, Y.、Nagafuchi, A. 和 Hirohashi, S.：“E-钙粘蛋白在体内细胞-细胞粘合界面上作为顺式二聚体发挥作用”Nat.Struct.Biol.. 6. 310
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 8 条
    βカテニンとPAR-3複合体の接着非依存的相互作用の解析
    • 批准号：
      20013037
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $9.22万
    • 财政年份：
      2008
    • 负责人：
      永渕 昭良
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    カドヘリン複合体とPAR-3複合体の接着非依存的相互作用の解析
    • 批准号：
      18013042
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $7.74万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      永渕 昭良
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    細胞の接着・移動においてカドヘリン結合タンパク質p120が果たす役割の解析
    • 批准号：
      03F00147
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $0.77万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      永渕 昭良
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    細胞の接着・移動においてカドヘリン結合タンパク質p120が果たす役割の解析
    • 批准号：
      03F03147
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $0.77万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      永渕 昭良
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    海外基金