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細胞の接着・移動においてカドヘリン結合タンパク質p120が果たす役割の解析

钙粘蛋白结合蛋白p120在细胞粘附和迁移中的作用分析

基本信息

批准号：
03F00147
负责人：
永渕昭良
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00147/
关键词：
p120 カドヘリン F9 標的組換え細胞接着エンドソームゴルジリサイクリング

项目摘要

本年度はまず、p120遺伝子を破壊するためのターゲティングベクターおよび、HAタグ付p120を発現させるためのターゲティングベクターの作成を行った。ターゲティングベクターはすべてプルモータートラップ型である。通常のターゲティングベクターとノックインタイプ(遺伝子は破壊するがcDNAが挿入されるため遺伝子破壊後もHAタグ付のp120タンパク質の発現が残るタイプ)の発現ベクターを作成した。ターゲティングベクター、発現ベクターともloxP配列を挿入することにより、p120のcDNAや薬剤耐性遺伝子をCre処理により除去できるような工夫をした。F9細胞にノックアウトベクターを導入し一回目の遺伝子破壊を試み成功した。しかし、この時点で、p120遺伝子はF9細胞には3つ存在することが判明した(F9細胞はカリオタイプに乱れがあるため、いくつかの遺伝子は2nでなくなっていることが知られている。)同じベクターを導入して高濃度の薬剤で処理したところ2つ目のアリルも墓する事に成功した。しかし3つ目のアリルは原因は不明であるが今のところ破壊された細胞を得ることが出来ない。p120の欠損が細胞レベルで致死である可能性を考え、ノックインベクターで遺伝子破壊を試みた。その結果、相同組換えが生じた細胞を得ることは出来たが、複数とれた細胞すべてでcDNA内で相同組換えが生じていた。これらの細胞では内在性のp120分子の発現は見られないが、HAタグ付のp120の弱い発現が見られた。このp120低発現細胞ではカドヘリンの細胞接着部位への濃縮が減少し、細胞質に大きな顆粒として局在する事が分かった。この顆粒は一部エンドソームマーカーと一部ゴルジマーカーと局在を共にする。現在、p120発現低下で生じるEカドヘリンの細胞内局在変化の原因の究明と完全なp120遺伝子破壊細胞の単離を試みている。

This year, the production of p120 and p120 was carried out. The most important thing is to keep your eyes open. Usually, the expression of the gene is created by the gene expression of the cDNA. The cDNA encoding and expression of p120 gene and its resistance gene are processed by Cre. F9 cells were successfully introduced into the genome. The p120 gene is present in the F9 cell at this time point, and the p120 gene is present in the F9 cell at this time point. In the same way, the introduction of high concentration of chemicals into the treatment of the problem is successful. The reason for this is unknown. p120-Loss of cells, death, possibility of death, death, etc. The result is that the same group of cells can be generated. The expression of endogenous p120 molecules in these cells is not observed, and the weak expression of p120 molecules in HA cells is not observed. The p120-expressing cells are concentrated in the cell-junction region, and the cytoplasm is divided into large particles. The particles are divided into two parts. Now, p120 gene expression is low, and the reasons for the change of intracellular structure of p120 gene are investigated.