权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

食餌摂取に応答する組織蛋白質合成の翻訳伸長調節機構の解析

组织蛋白合成响应食物摄入的翻译延伸调节机制分析

基本信息

批准号：
12760098
负责人：
吉澤史昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Utsunomiya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

翻訳段階の重要な調節段階であるペプチド鎖伸長段階に注目し、ペプチド鎖伸長を調節する因子のうち伸長因子1(EF-1)と伸長因子2(EF-2)の活性測定法の確立を試みた。EF-1はα、β、β'、γ(またはα、β、γ)サブユニットより構成されており、GTPおよびaa-tRNA存在下に、EF-1α・GTP・aa-tRNA三重複合体を形成し、aa-tRNAをリボソームに結合させ、EF-1α・GDPがリボソームから遊離する。EF-1α・GDPからEF-1α・GTPを再生するββ'γのGDP/GTP交換活性が伸長活性に大きく影響することからββ'γのGDP/GTP交換活性を測定することが重要である。予め調製しておいたEF-1α・[^3H]GDPを基質として用いて、ラット肝臓のββ'γのGDP/GTP交換活性の測定を試みたが、生体内のββ'γ活性を評価できる測定方法の確立には至らなかった。ββ'γを組織から調製する際に用いる緩衝液および活性測定を行う際の温度の検討が今度の課題である。ペプチド鎖転移反応を触媒するEF-2は、その活性がリン酸化により調節されている。EF-2のリン酸化状態を調べるためには抗EF-2抗体が必要であるが、EF-2は動物種間での相同性が高く抗体作製が困難である。そこでEF-2の活性に関係するリン酸化部位(Thr56)付近のアミノ酸配列と同様なペプチド(ARAGETRFTDTRKD)を合成し、N末端にCysを添加しキャリアータンパク質(KLH)と結合させてこれを抗原としてウサギに免疫した。得られた抗血清から抗体をAffinity精製し、この抗体を用いてラットEF-2の検出を試みた。ラットの組織から調製したEF-2を等電点電気泳動法でリン酸化状態の違いにより分離し、その後作製した抗ペプチド抗体を用いてイムノブロットを行った結果、リン酸化EF-2と非リン酸化EF-2の両方が検出された。本研究で作製した抗ペプチド抗体はラットEF-2のリン酸化状態の測定に利用可能であり、EF-2のリン酸化状態を調べることでEF-2の活性を予想することが可能である。

An activity assay was established to determine the elongation factor 1(EF-1) and elongation factor 2(EF-2) of the critical regulation stage of the inversion stage. EF-1α·GTP·aa-tRNA triple complex is formed in the presence of α, β, β'and γ(α, β, γ), and EF-1 α·GDP triple complex is formed in the presence of aa-tRNA, aa-tRNA, and EF-1α·GDP triple complex. EF-1α·GDP and EF-1α·GTP are important for determining β β 'γ GDP/GTP exchange activity. Determination of β β 'γ GDP/GTP exchange activity in the matrix of EF-1α·[^3H]GDP in vivoβ'γ is a new type of protein that can be used in the preparation of β' γ. EF-2, which acts as a catalyst for superoxide anion shift reactions, regulates these activities by increasing their acidity. EF-2 is highly similar to EF-2 in animal species, and it is difficult to produce antibodies against EF-2. EF-2 activity is related to the acid site (Thr56), the acid sequence and identity (ARAGETRFTDTRKD), synthesis, N-terminal addition of Cys, and binding to the antigen. Anti-serum Affinity Purification and Anti-EF-2 Detection The structure of EF-2 was modulated by isoelectric point electrophoresis, and then the anti-tumor antibody was detected by isoelectric point electrophoresis. In this study, we developed an anti-retroviral antibody that could be used to determine the acidification status of EF-2 and to predict EF-2 activity.