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変異導入受容体を利用したプロスタノイド受容体のリガンド認識構造の解明

使用突变受体阐明前列腺素受体的配体识别结构

基本信息

批准号：
12770057
负责人：
小林拓也
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

PGは、プロスタン酸を基本構造とし、五員環の9、11位に存在する官能基(oxo-、hydroxyl-基)と側鎖の二重結合数によって分類される。即ち、五員環構造よりD、E、F、Iの4タイプとオキサン環を持つTXに、側鎖構造の二重結合数より1、2、3の3シリーズに分類される。受容体はこの僅かな構造の違いを識別するが、どのアミノ酸残基が識別しているのか全く分かっていない。キメラ受容体を用いた解析により、側鎖構造と五員環構造を識別する部位は別々に存在していることが明らかとなった。五員環構造の識別には第1〜3膜貫通領域が、側鎖構造の識別には第6、7膜貫通領域が、各々関与していることが示唆された(Kobayashi, T. et al. J. Biol. Chem., 272, 15154-15160, 1997)。次に、五員環構造識別部位を限定するために、さらにキメラ受容体を作成した。その結果、五員環構造の識別には第1膜貫通領域から第1細胞外ループが関与していることを明らかにした。また、DPの第2膜貫通領域と第1細胞外ループをIPに置き換えると、iloprostのみ結合した。次に、このキメラ受容体を用いてアミノ酸変異受容体を作成した。機能的に同一のグループに属AするDP、EP2、IPのアミノ酸配列を比較した。DPとEP2で共通でIPと異なるアミノ酸残基に注目し、DPの第2膜貫通領域のLeu83とLys75が各々iloprost結合を排除し、PGD_2の結合親和性を高めることが明らかとなった。また、IPとEP2で共通でDPと異なるアミノ酸残基に注目し、IPの第1膜貫通領域のSer50が五員環構造識別の選択性の低さに関与していることが明らかとなった。

PG is classified according to the basic structure, the presence of functional groups (oxo-, hydroxyl-) at positions 9 and 11 of the five-membered ring, and the double binding number of side locks. That is, the structure of five members ring D, E, F, I and four members ring TX, side lock structure and double combination number 1, 2, 3 and 3 are classified. The receptor is identified only by the structure and the acid residue. The structure of the five-member ring is distinguished by the structure of the receiver. The identification of five-member ring structures is based on the first to third membrane penetration domains, and the identification of side-locked structures is based on the sixth and seventh membrane penetration domains, and the relationship between each membrane penetration domain and the other membrane penetration domain (Kobayashi, T. et al. J. Biol. Chem., 272, 15154-15160, 1997)。The next five ring structure identification parts are limited to the first five ring structure identification parts. As a result, the identification of five-member ring structure is related to the first membrane penetration domain and the first extracellular domain. The 2nd membrane penetration domain of DP and the 1st extracellular domain of IP are combined. Second, the use of different acid receptors to create different receptors Function of the same group belongs to A DP, EP2, IP and acid allocation comparison DP and EP2 have common IP and different amino acid residues, DP and EP 2 have different binding affinity, and DP and EP 2 have different binding affinity. IP and EP2 share the same acid residue as DP and Ser50 in the first membrane penetration domain, and the selectivity of five-membered ring structure recognition is low.