ヒト口腔扁平上皮癌培養細胞株への単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ遺伝子導入(殺細胞メカニズムに関する検討)

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因导入人口腔鳞癌培养细胞系（细胞杀伤机制研究）

• 批准号: 12877326
• 负责人: 領家 和男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877326/
• 关键词: 遺伝子導入; アポトーシス

単純ヘルペスウイルス(HSV)の遺伝子上にコードされるチミジンキーナゼ(tk)は,哺乳類のtkと異なった基質特異性をもっている。この違いを利用して開発された抗ウイルス剤の一つにグアノシン類似化合物であるガンシクロビル(GCV)がある.GCVはHSV-tkによって特異的にリン酸化されるが,三リン酸化物は強い毒性を表わす。非感染細胞ではこれらはリン酸化されないので,細胞毒性を発揮しない。HSV-tkはGCVを投与してはじめて細胞毒性を発揮する。ヒト口腔扁平上皮培養細胞4株(HSC-3,HSC-4,SCC-TF)にアデノウイルスベクターを用いてHSV-tk遺伝子を導入し,GCVに対する感受性をMTT assayで検討した。誘導される細胞死についてTUNEL法,DNA fragmentation, FAC scan, Western blotを用い検討した。今年度は12年度に行った実験の対象数を増やし,結果の精度をあげることに加え,細胞死のメカニズムについてP53の関与に関連しBax, Bcl-XL, Caspase発現について検討した。結果:HSV-tk遺伝子を導入した全ての細胞株でGCV感受性が増加し,細胞死が誘導された。SCC-KNおよびSCC-TFではTUNEL法でアポトーシスの誘導が示唆されたが,DNA ladderは観察されなかった。フローサイトメトリーにおけるPre-G1の経時的増加,Annexin V-FITC陽性細胞の出現によりアポトーシスの関与がうかがえた。ウエスタンブロットでHSC-3, HSC-4でP53は不変であった。SCC-KN,SCC-TFにおいてBcl-2の上昇があった。すべての細胞株でBax, Bcl-XLには変化がなかった。まとめ:ヒト口腔扁平上皮癌培養細胞株おけるtk遺伝子導入によるGCV誘導細胞死はP53遺伝子非依存性であることが示唆された。

In the case of pure HSV, there is no difference in the matrix specificity of mammals. The use of these compounds has led to the development of a new class of anti-inflammatory compounds called GCV (GCV).GCV HSV-tk is a highly toxic, tri-inflammatory compound. Non-infected cells are not immune to cytotoxicity. HSV-tk is a cytotoxic agent. Four oral squamous epithelial cell lines (HSC-3,HSC-4,SCC-TF) were tested for their sensitivity to GCV by MTT assay. TUNEL method,DNA fragmentation, FAC scan, Western blot were used to detect cell death. This year, the number of subjects has increased since the 12th year, and the accuracy of the results has increased. The relationship between P53 and Bax, Bcl-XL, Caspase discovery has been discussed. Results: After HSV-tk gene was introduced into all the cell lines, GCV sensitivity increased and cell death was induced. SCC-KN and SCC-TF are used to detect the DNA ladder. The increase of Pre-G1 and Annexin V-FITC positive cells were related to the increase of Pre-G1 and Annexin V-FITC positive cells. HSC-3, HSC-4 SCC-KN,SCC-TF Bcl-2. Bax, Bcl-XL cell lines are transformed. GCV induction of cell death in cultured oral squamous cell carcinoma cell lines is dependent on P53 gene.