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白血病阻止因子(LIF)のカルシニューリンを介するアポトーシス抑制機構の解明

阐明钙调神经磷酸酶介导的白血病抑制因子（LIF）的凋亡抑制机制

基本信息

批准号：
12770355
负责人：
山根明子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

抗癌剤タキソールはアポトーシス抑止機能を持つBcl族蛋白をセリンリン酸化し、アポトーシス抑止機能を喪失させることにより、アポトーシスを誘導する。我々は新生仔ラット培養心筋細胞を48時間の血清除去やタキソールで刺激し、アポトーシスを誘導した。カルシニューリンはこのアポトーシスの過程において、関与していた。カルシニューリンの阻害薬CsA、FK506存在下に、血清除去およびタキソールによりアポトーシスの誘導を観察したところ、アポトーシスは一部抑制された。アポトーシスの誘導の評価はMTT assayによる細胞のviability、DNAのladdering、in situ TUNEL assay、Caspase3活性の測定により行った。次に、Dominant negative型のカルシニューリン遺伝子およびConstititive active型のカルシニューリン遺伝子をアデノウイルスベクターで心筋細胞に導入し、同様に血清除去およびタキソール刺激によるアポトーシスの誘導を観察した。さらに、培養心筋細胞が血清除去やタキソール除去でアポトーシスに陥ること、およびCsA、FK506の前処置により、非常に強いアポトーシスが誘導されることを確認した。血清除去やタキソールによりアポトーシス抑止機能を持つBcl族蛋白(Bcl-2,Bcl-XL,Mcl-1)のリン酸化状態の変化をWestern blot法で観察したところ、カルシニューリンはBcl族蛋白の脱リン酸化を介してアポトーシスを制御していた。同様にCsA、FK506の前処置やDominant negative型、Constititive active型のカルシニューリン遺伝子導入を行った後に、血清除去やタキソールによるアポトーシス誘導を行い、Bcl族蛋白(Bcl-2,Bcl-XL,Mcl-1)のリン酸化の状態を観察したところ、カルシニューリンはBcl族蛋白の脱リン酸化を介してアポトーシスを制御していた。

The anti-cancer agent has the ability to inhibit the function of Bcl family protein, and the inhibition function of Bcl family protein is lost. The serum of newborn cultured cardiac muscle cells was removed from the serum for 48 hours, and the serum was induced. In the process of collecting information, the author tries to find out the relationship between them. In the presence of CsA and FK506, the serum was removed and the induction of CsA and FK506 was observed. Cell viability, DNA laddering, in situ TUNEL assay and Caspase3 activity assay were evaluated for apoptosis induction. The second, Dominant negative and Constant active type of serum are introduced into the heart muscle cells, and the same serum is removed from the heart muscle cells. In addition, it was confirmed that the serum of cultured cardiac muscle cells was removed from the serum, and the serum of CsA and FK506 was removed from the serum. Western blot was used to detect the deacidification of Bcl family proteins (Bcl-2,Bcl-XL,Mcl-1), which was mediated by serum deacidification. Similarly, CsA, FK506 pre-treatment, Dominant negative type, Constant active type of protein after gene introduction, serum removal and protein synthesis, Bcl family protein (Bcl-2,Bcl-XL,Mcl-1) acidification state detection, protein purification, Bcl family protein inactivation and control.