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p53C末端ペプチドによる放射線・温熱癌治療増感の基礎的研究

使用p53 C末端肽进行放射/热癌症治疗增敏的基础研究

基本信息

批准号：
13877143
负责人：
大西武雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877143/
关键词：
p53 C末端ペプチド放射線温熱リン酸化アポトーシス Caspase-3 DNA結合能

项目摘要

【目的】本研究は、変異型p53タンパク質にアポトーシス誘導能を回復させる働きを持つp53C末端ペプチドを人工的に合成し、それを癌細胞に導入することにより、変異型p53患者においても効率の良いアポトーシスを誘導することをねらいとしている。本年度はさらに細胞増殖の停止をもたらすWAF1タンパク質の発現誘導がp53C末端ペプチドによって回復するかどうかについても調べた.【方法】p53の表現型が正常型の舌扁平上皮癌細胞SASとp53欠損ヒト肺癌細胞H1299に変異型p53遺伝子(codon 248, Arg→Trp)およびneoコントロールベクターを導入し実験に用いた。X線あるいは温熱処理する前に、二種の合成p53C末端ペプチド(アミノ酸残基361-382と353-374)をこれら細胞に導入し、アポトーシス誘導を調べた。アポトーシスの解析はヘキスト染色法およびアポトーシス関連蛋白質の免疫細胞染色法で行った。細胞増殖の停止についてはWAF1タンパク質の免疫細胞染色法で解析を行った。また、未処理あるいはX線/温熱処理した細胞から抽出した蛋白質にp53C末端ペプチド加えたin vitro gel shift assayをSASとH1299の両細胞で行った。【結果】正常型p53癌細胞は変異型p53癌細胞に比べX線あるいは温熱誘導アポトーシスの出現率が低いが、合成p53C末端ペプチドを併用すると、変異型p53癌細胞のX線あるいは温熱誘導アポトーシスが増強されることを確認した。また、合成p53C末端ペプチドを前処理すると、変異型p53癌細胞にもX線/温熱で誘導される活性型Caspase-3陽性細胞、断片化PARP陽性細胞およびWAF1陽性細胞の増加及びアポトーシスの増強が見られるようになった。p53C末端ペプチドは変異型p53蛋白質のDNA(p53CON)結合能を回復させるが、SASあるいはH1299細胞にX線あるいは温熱処理するとその結合能はより増強されることが分かった。このような効果はnegative controlのp53N末端ペプチド(14-27)には見られなかった。【考察】p53C末端ペプチドによる変異型p53のDNA結合能の回復は放射線/温熱によるp53活性化で増強されることが示唆された。その結果、p53依存的なCaspase-3活性化を介したX線あるいは温熱誘導アポトーシスが増強されるものと考えられる。一方、WAF1タンパク質の誘導回復が見られたことから、細胞増殖の停止もp53C末端ペプチドで増強される可能性が示唆された。【結論】変異型p53癌細胞に対しp53C末端ペプチドを併用した放射線/温熱治療が有効であることが示唆された。

[Objective] In this study, we investigated the induction of p53 protein in different types of p53 by artificial synthesis and introduction into cancer cells, and the induction of p53 protein in different types of p53 patients. This year, cell proliferation stopped, WAF1 started, and the expression of p53 C-terminal protein was induced. [Methods] The expression of p53 changed from normal to abnormal in tongue squamous cell carcinoma cells SAS to lung cancer cells H1299, and the variant p53 gene (codon 248, Arg→Trp) changed from neo to neo. X-ray induction of two synthetic p53 C-terminal residues (amino acid residues 361-382 and 353-374) prior to heat treatment is regulated by cell introduction and induction. The analysis of protein by immunocytochemical staining was carried out. Cell proliferation and protein analysis by immunocytochemical staining Untreated cells were treated with X-ray/heat to extract protein from p53 C-terminal and added in vitro gel shift assay to SAS and H1299 cells. [Results] Compared with normal p53 cancer cells, the occurrence rate of thermo-induced apoptosis was lower in synthetic p53 C-terminal mutant cells and higher in heteromorphic p53 cancer cells. The increase of active Caspase-3 positive cells, fragmented PARP positive cells, and WAF1 positive cells and the enhancement of the expression of p53 protein were observed in X-ray/hyperthermia induced p53 cancer cells. The binding energy of DNA(p53CON) with p53 C-terminal protein was restored and increased by SAS in H1299 cells treated with X-ray and heat. The negative control of the p53N terminal of the negative control (14-27) [Investigation] The DNA binding energy of p53 C-terminal protein was increased by radiation/heat. The results showed that p53-dependent Caspase-3 activation was mediated by X-ray, and thermo-induced Caspase-3 activation was enhanced by X-ray. On the one hand, WAF1 protein induced recovery was found to increase the possibility of cell proliferation and stop p53 C-terminal selection. [Conclusion] Different types of p53 cancer cells can be treated with radiation and hyperthermia.