权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

キメラオリゴヌクレオチドを用いたイネにおける遺伝子ターゲッティング法の開発

使用嵌合寡核苷酸开发水稻基因打靶方法

基本信息

批准号：
15658001
负责人：
鳥山欽哉
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

キメラRNA/DNAオリゴヌクレオチドは、RNAとDNAからなる合成オリゴヌクレオチドであり、ゲノム中の標的遺伝子を部位特異的に1塩基置換する方法が哺乳類において開発されている。我々は、キメラRNA/DNAオリゴヌクレオチドを胚盤由来の2倍体カルスにパーティクルガンで導入することにより、標的塩基に1塩基置換を起こすことがイネにおいて可能であることを明らかにした。塩基置換を起こす頻度を調査した結果、胚盤由来のカルスの場合、導入細胞あたり3.3x10-5であった。コケなどの半数性植物では相同組み換えを起こしやすいことが知られているので、葯培養由来のカルスを用いて、半数性細胞と2倍体細胞において塩基置換を起こす頻度を比較した。その結果、葯培養由来のカルスはおよそ60%が半数性であること。葯培養由来のカルスは胚盤由来のカルスに比べ塩基置換の頻度は10倍高いが、自然突然変異の頻度も高くアルビノが多いこと。半数性の細胞と2倍体の細胞で塩基置換の頻度に差が見られないことがわかった。通常のco-transformationでは選抜マーカーと非選抜マーカーの両方の遺伝子が導入される確率はおよそ50%である。同様に、2種類、あるいは3種類のキメラRNA/DNAオリゴヌクレオチドを混合して導入した場合、2カ所同時に塩基置換が可能かどうか検討した。しかし、2箇所で同時に塩基置換したものは得られなかった。この技術を実用化するためには、2箇所の異なる遺伝子に同時に塩基置換を誘導する条件検討する必要がある。

The method of site-specific base substitution of target genes in mammalian DNA synthesis and RNA/DNA synthesis is proposed. The gene expression of RNA/DNA was detected by PCR. The gene expression of RNA/DNA was detected by PCR. The frequency of gene substitution was investigated. The origin of blastoderm was investigated. The introduced cells were 3.3x10-5. A comparison of the frequency of gene replacement between half of the plants and half of the plants. The result of the drug culture is 60% of the drug culture. The frequency of radical replacement is 10 times higher than that of blastoderm origin, and the frequency of natural sudden change is higher than that of blastoderm origin. The frequency of gene substitution in half of the cells and diploids was different. Usually, the co-transformation rate is 50%. The same, 2 kinds, 3 kinds of RNA/DNA, 2 kinds of DNA, 3 kinds of RNA/DNA, 3 The two of them are at the same time, and the base is replaced by the base. This technique is applied to the study of the necessary conditions for the induction of radical substitution.