住血寄生性原虫(トリパノソーマ)を用いた糖鎖構造機能解析モデル系の開発

开发利用裂寄生原生动物（锥虫）分析糖链结构和功能的模型系统

• 批准号: 15658085
• 负责人: 杉本 千尋
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15658085/
• 关键词: トリパノソーマ; 糖鎖修飾; 糖蛋白質; オリゴサッカリルトランスフェラーゼ; 2本鎖RNA干渉

N-結合型糖鎖合成において糖鎖転移に重要な役割を果たす酵素系の一つであるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)遺伝子をTrypanosoma bruceiからクローニングし、その構造解析を行った。同遺伝子は2種類見出され、それぞれOST1,OST2と命名した、N-グリコシレーションに関わるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)遺伝子をクローニングした。すなわち、Leishmania major(L.major)のOST STT3サブユニットの運伝子配列を基にして、プライマーを設計し、PCRにより2種類のOST遺伝子をT.brucei染色体DNAから得た。それらを、TbOST I、TbOST IIと命名し、それぞれ2,430kbp、2,406kbpの遺伝子全長を解析した。予想アミノ酸配列の比較では、他生物の既知OST STT3サブユニットとは高い相向性を示し、ドメイン構造も保存されていることが明らかとなった。それぞれの転写産物のサイズは前者では3.5および4.5kb、後者ではおよそ3.5kbであった。予想アミノ酸配列から設計した合成ペプチドにより作製した免疫血清は原虫の74kDaの蛋白質と皮応した。さらに、TbOSTを2本鎖RNA干渉用のベクターに組み込んで、dsRNAiによる本遺伝子産物の機能解析を試みた。その結果、本遺伝子の発現抑制は致死的であり、TbOSTが原虫の生存に必須の蛋白質をコードしていることを明らかにした。TbOST発現を抑制された原虫細胞質内には濃染する顆粒構造が出現することが米学顕微鏡ならびに電子顕微鏡観察で認められた。これらの出現形質は原虫蛋白質のN-グリコシレーションの阻害とマンノース6燐酸系の阻害の結果と考えられた。また、機能的にもTbOSTは酵母菌OST STT3サブユニットの相当する分子と考えられた。

N - type combination lock sugar synthesis に お い て sugar lock planning move important な に "を cut fruit た す enzyme to tie の つ で あ る オ リ ゴ サ ッ カ リ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (OST) posthumous son 伝 を Trypanosoma brucei か ら ク ロ ー ニ ン グ し, そ の structure line を っ た. Son with heritage 伝 は out 2 kinds さ れ, そ れ ぞ れ OST1, OST2 と named し た, N - グ リ コ シ レ ー シ ョ ン に masato わ る オ リ ゴ サ ッ カ リ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (OST) heritage 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し た. す な わ ち, Leishmania major (" ajor) の OST STT3 サ ブ ユ ニ ッ ト の luck 伝 with sequence を base に し て, プ ラ イ マ ー を し design, PCR に よ り 2 kinds の OST heritage 伝 son を T.b rucei chromosome DNA か ら た. Youdaoplaceholder0, TbOST I, TbOST IIと naming た, それぞれ2,430kbp, 2,406kbp cultural heritage 伝 total length を analysis た た. To think ア ミ ノ acid with column の is で は, he is known biological の OST STT3 サ ブ ユ ニ ッ ト と は high い opposite sex を し, ド メ イ ン tectonic も save さ れ て い る こ と が Ming ら か と な っ た. そ れ ぞ れ の product planning write の サ イ ズ は former で は 3.5 お よ び 4.5 KB, the latter で は お よ そ 3.5 KB で あ っ た. To want to ア ミ ノ acid with column か ら design し た synthetic ペ プ チ ド に よ り cropping し た immune serum は parasite の 74 kda protein の と skin 応 し た. さ ら に, TbOST を 2 dry involved with this lock RNA の ベ ク タ ー に group み 込 ん で, dsRNAi に よ る this heritage 伝 zi chan content analytical を の function try み た. そ の results, the heritage 伝 son の 発 now inhibit lethal は で あ り, TbOST が parasite の survival に must の protein を コ ー ド し て い る こ と を Ming ら か に し た. TbOST 発 now を inhibit さ れ た parasite cytoplasm に は thick dye す る granular structure appeared が す る こ と が m learn 顕 micromirror な ら び に electronic 顕 micromirror 観 examine で recognize め ら れ た. こ れ ら の appear character は parasite protein の N - グ リ コ シ レ ー シ ョ ン の resistance against と マ ン ノ ー ス 6 燐 acid is の resistance against の results と exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0, functional に <s:1> TbOST yeast OST STT3サブユニット <s:1> equivalent する molecules と study えられた.

项目成果

組換えリボソームPO蛋白質を用いたトリパノソーマ特異的ELISA法の開発

使用重组核糖体 PO 蛋白开发锥虫特异性 ELISA 方法

• 发表时间: 2004
• 期刊: 獣医寄生虫学会誌 3
• 作者: Hayashi;S.;Yamagishi;J.;Kotchasatid;A.;Jongdee;B.;Kamoshita;A.;櫻井 達也
• 通讯作者: 櫻井 達也

トリパノソーマ コンゴレンセ特異的診断法の開発

刚果锥虫特异性诊断方法的开发

• 发表时间: 2005
• 期刊: 獣医寄生虫学会誌 3
• 作者: ワレン バティカドス

トリパノソーマ エバンシ実験感染豚由来血液を用いたLAMP法の評価

使用实验感染伊氏锥虫的猪的血液进行 LAMP 方法的评估

• 发表时间: 2005
• 期刊: 獣医寄生虫学会誌 3
• 作者: YOSHIMURA;Yukinori;オリエル テキソエ
• 通讯作者: オリエル テキソエ

Expression of a gene encoding Trypanosoma congolense Putative Abcl family protein is developmentally regulated.

编码刚果锥虫推定 Abcl 家族蛋白的基因的表达受到发育调节。

• 发表时间: 2005
• 期刊: The Journal of Veterinary Medical Science 67
• 作者: YOSHIMURA;Yukinori;K.Nakahara;Waren N.Baticados
• 通讯作者: Waren N.Baticados