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住血寄生性原虫(トリパノソーマ)を用いた糖鎖構造機能解析モデル系の開発

开发利用裂寄生原生动物（锥虫）分析糖链结构和功能的模型系统

基本信息

批准号：
15658085
负责人：
杉本千尋
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

N-結合型糖鎖合成において糖鎖転移に重要な役割を果たす酵素系の一つであるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)遺伝子をTrypanosoma bruceiからクローニングし、その構造解析を行った。同遺伝子は2種類見出され、それぞれOST1,OST2と命名した、N-グリコシレーションに関わるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)遺伝子をクローニングした。すなわち、Leishmania major(L.major)のOST STT3サブユニットの運伝子配列を基にして、プライマーを設計し、PCRにより2種類のOST遺伝子をT.brucei染色体DNAから得た。それらを、TbOST I、TbOST IIと命名し、それぞれ2,430kbp、2,406kbpの遺伝子全長を解析した。予想アミノ酸配列の比較では、他生物の既知OST STT3サブユニットとは高い相向性を示し、ドメイン構造も保存されていることが明らかとなった。それぞれの転写産物のサイズは前者では3.5および4.5kb、後者ではおよそ3.5kbであった。予想アミノ酸配列から設計した合成ペプチドにより作製した免疫血清は原虫の74kDaの蛋白質と皮応した。さらに、TbOSTを2本鎖RNA干渉用のベクターに組み込んで、dsRNAiによる本遺伝子産物の機能解析を試みた。その結果、本遺伝子の発現抑制は致死的であり、TbOSTが原虫の生存に必須の蛋白質をコードしていることを明らかにした。TbOST発現を抑制された原虫細胞質内には濃染する顆粒構造が出現することが米学顕微鏡ならびに電子顕微鏡観察で認められた。これらの出現形質は原虫蛋白質のN-グリコシレーションの阻害とマンノース6燐酸系の阻害の結果と考えられた。また、機能的にもTbOSTは酵母菌OST STT3サブユニットの相当する分子と考えられた。

An enzyme system for N-linked glycochain synthesis, which plays an important role in glycochain migration, is used for structural analysis of Trypanosoma brucei. The same type of seed is found in OST 1,OST2, and N-type seed is found in OST1,OST2, and N-type seed is found in OST 2. OST STT3 of Leishmania major(L.major) is derived from chromosome DNA of T.brucei of two kinds of OST genes. TbOST I and TbOST II were named, and their full length was analyzed. To compare the acid alignment of the two species, the known OST STT3 has a high degree of symmetry, and the structure of the two species is preserved. The former is 3.5 kb and the latter is 3.5 kb. To prepare the 74kDa protein of the immune serum, we designed a new method of synthesis. In this paper, TbOST 2 RNA RNA stem is used to analyze the function of the gene product. As a result, the development of this parasite is inhibited, and the protein necessary for the survival of the parasite is released. TbOST expression is inhibited by the presence of granular structures in protozoan cytoplasm. A Study on the Effect of N-linked Protein on the Growth of Protozoa TbOST, yeast STT3, and its molecular equivalents