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一本鎖抗体によるトリパノソーマ原虫表面分子の構造解析

使用单链抗体对锥虫原生动物表面分子进行结构分析

基本信息

批准号：
09F09337
负责人：
杉本千尋
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

Trypanosoma bruceiのゲノムデータベースを検索することにより、13種のC-type lectinの遺伝子配列をゲノム上に特定できた。いずれもその予測産物のN末端近くにC-type lectinドメイン(糖鎖結合部位)を有し、VC末端側には膜貫通領域を有し、膜表面蛋白質として発現しており、糖鎖を含む宿主分子と相互作用すると予測できた。これらのうち、3種の遺伝子をゲノムDNAから増幅し塩基配列を確認後、大腸菌に組み込んで発現させ、組換え蛋白質でマウスを免疫し抗血清を得た。この血清で発現を確認したところ、T. brucei rhodesiense血流型、昆虫型ともに細胞表面に発現していることが確認できた。さらに糖鎖結合能を測定するため、糖蛋白質(thyroglobin)を固相化したプレートに組換え蛋白質を反応させたが1結合性は検出できなかった。昆虫細胞系での発現も試みたが、組換え蛋白質の発現は確認できたものの精製は困難であり、解析に必要な純度を持つ標品を十分量調製するには至らなかった。本分子は、トリパノソーマ原虫では初めて確認されたものであり、病原性との関連が考えられた。次いで、IgE依存性ヒスタミン放出因子と考えられる遺伝子をT. bruceiゲノム配列上に見出し、遺伝子クローニング、その塩基配列解析と発現を行った。作製した抗体による蛍光抗体染色により、本蛋白質が血流型、昆虫型とも原虫細胞質に発現していることを確認した。本遺伝子発現を抑制することにより、増殖が30%程度減少した。組換え産物を用いて生物学的活性を検討した結果、マウスマスト細胞からのConA依存性Il-4,Il-13放出抑制は起こらず、生物活性の検出はできなかった。本分子もトリパノソーマ感染における病態形成に何らかの役割を果たしていると考えられることから、さらに研究を進める必要がある。

Trypanosoma brucei has to be selected from the group consisting of 13 C-type lectin molecules. C-type lectin binding site near the N-terminal of the predicted product, membrane penetration domain on the VC terminal side, membrane surface protein development, and host molecular interaction prediction of the predicted product. After confirmation of the DNA sequence, the E. coli group was found, and the protein group was obtained. The serum was identified by T. Brucei rhodesiense blood flow type, insect type and cell surface detection Determination of glycoglobin binding energy and glycoglobin binding energy Insect cell line development test, component protein development, confirmation, purification, analysis, necessary purity, ten-point modulation, and so on. This molecule is very sensitive to pathogens. Secondary, IgE dependent, emission factors, etc. brucei, on the list of possible causes, and the list of possible causes. The protein was detected in the cytoplasm of both bloodstream and insect-type protozoa by light antibody staining. The reproduction of the virus was suppressed by 30% and the reproduction was reduced by 30% The biological activity of the product is investigated by using the results of the assay. The cell cycle is dependent on IL-4 and IL-13. The inhibition of IL-4 and IL-13 release is investigated by using the assay. This molecule is very important for the development of disease.